[發明專利]一種檢測脊髓性肌萎縮癥數字PCR試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202011523363.5
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112522389B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 陳芊如;王芳;郭娜;郭永;祝令香;楊文軍
• 申請（專利權）人: 清華大學;新羿制造科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 暫無信息
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本發明提供一種檢測脊髓性肌萎縮癥數字PCR試劑盒，所述數字PCR試劑盒是在一管數字PCR反應中同時檢測待測樣中SMN1外顯子7、SMN1外顯子8和SMN2外顯子7以及內參基因的數字PCR試劑盒，在至少四個熒光通道中同時檢測SMN1外顯子7、SMN1外顯子8和SMN2外顯子7和內參基因。本發明試劑盒基于數字PCR技術，可以一管完成SMN1外顯子7、8和SMN2的拷貝數定量檢測，可應用于SMA臨床確診、攜帶者篩查和疾病分型。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種檢測脊髓性肌萎縮癥數字PCR試劑盒及其應用。

背景技術

常染色體隱性疾病脊髓性肌肉萎縮癥(Spinal Muscular Atrophy，SMA)是一種嚴重的神經肌肉疾病，其特征是脊髓中α運動神經元的退化，導致近端肌肉逐漸無力和癱瘓。SMA是僅次于囊性纖維化的一種最常見的致命性常染色體隱性疾病，發病率為1/6000-1/10000，攜帶率為1/40-1/60。

SMA是由SMN1基因突變或缺失引起的。正常人的SMN1基因為2拷貝基因，95％的SMA患者存在著SMN1外顯子7的純合缺失(0個拷貝)，且大部分是外顯子7、8同時缺失，只有少部分僅缺失外顯子7，也有報道指出存在僅缺失外顯子8的患者。其余5％的患者中，其SMN1基因含有其他突變，在中國人群中有兩個較常見的突變，分別是外顯子1的c.22dupA和外顯子5的c.683TA。

由于SMA是一種常染色體隱性遺傳，只擁有1個拷貝的正常SMN1基因即為攜帶者，雖然不會顯示出SMA的病癥，但若父母同為攜帶者，他們每次懷孕，孩子是SMA患者、SMA致病基因攜帶者和健康的機率分別為25％、50％和25％。此外，也有部分人群2個拷貝的正常SMN1都位于一個等位基因上，另一個等位基因的SMN1外顯子7純合缺失，這部分人也是攜帶者。SMA一旦發病無經濟有效的治療手段，將給家庭帶來心理和經濟上的沉重負擔，因此現階段通過產前篩查降低人群中SMA患兒的出生率，是一種符合衛生經濟學的篩查策略。

SMN2的數量在決定SMA表型的嚴重性方面至關重要。根據發病年齡和臨床病程，可將SMA分為四個臨床類型。I型SMA的特點是出生時或出生3個月內出現嚴重的全身性肌無力和肌張力低下，因呼吸衰竭而死亡通常發生在出生后兩年內，約80％的I型SMA患者擁有1或2個SMN2基因拷貝。II型患兒能坐但不能獨立站立或行走，一般可存活4年以上，約82％的II型SMA患者具有3個SMN2基因拷貝。III型SMA在嬰兒期或青年時期發病，患者能學習獨立行走，存活時間較長，約96％的III型SMA患者擁有3或4個SMN2基因拷貝。在20-30歲出現首發癥狀的病例，為Ⅳ型SMA，約100％的IV型SMA患者擁有4或6個SMN2基因拷貝。SMN1和SMN2基因只有5個堿基不同，其中SMN2外顯子7的一個CT的變化導致剪接調節劑被破壞，從而使SMN2大多數的轉錄產物缺乏外顯子7。缺乏外顯子7的SMN mRNA編碼的氨基酸不能有效地低聚且會迅速降解，因此SMN2不能像SMN1那樣產生那么多的全長SMN蛋白，SMN2在SMA患者中起著劑量補償作用。