[發(fā)明專利]大腸桿菌Escherichia coli ETEC BE-311-faeG及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011522510.7
• 申請(qǐng)日: 2020-12-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112522172B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭小華;胡佳;張莉;盧霜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南民族大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N15/31;A61K35/741;A61P1/00;A61P31/04;C12R1/19
• 代理公司: 武漢華旭知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 42214
• 代理人: 劉榮

1.一種大腸桿菌Escherichia coli ETEC BE-311-faeG菌株，其16SrDNA序列如SEQ IDNO.1所示；大腸桿菌Escherichia coli ETEC BE-311菌株，該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)；郵編 430072，保藏日期為2019年9月18日，保藏編號(hào)為：CCTCC NO：M2019733，分類學(xué)命名Escherichia coli。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌Escherichia coli ETEC BE-311-faeG菌株制備為保護(hù)腸道的藥物中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌Escherichia coli ETEC BE-311-faeG菌株，其特征在于制備方法為：

步驟1.大腸桿菌表面展示表達(dá)載體的構(gòu)建：選取Lpp前29個(gè)氨基酸序列設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行生物合成；根據(jù)OmpA的基因序列設(shè)計(jì)引物，并以腸桿菌DH5α基因組DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增，將兩段基因通過(guò)重疊延伸PCR的方式進(jìn)行融合表達(dá)，構(gòu)成pQE30-Lpp’OmpA質(zhì)粒；選擇K88菌毛的主要蛋白亞基faeG為目的基因進(jìn)行黏附素的擴(kuò)增，并與pQE30-Lpp’OmpA質(zhì)粒進(jìn)行連接，完成pQE30-Lpp’OmpA-faeG重組表達(dá)載體的構(gòu)建。

步驟2.大腸桿菌Escherichia coli ETEC BE-311的外源黏附素表達(dá)：用CaCl₂法將大腸桿菌Escherichia coli ETEC BE-311制備成大腸桿菌感受態(tài)；將步驟1中構(gòu)建好的pQE30-Lpp’OmpA-faeG質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至感受態(tài)中，培養(yǎng)得到大腸桿菌Escherichia coli ETEC BE-311-faeG。