[發(fā)明專(zhuān)利]一種髓鞘堿性蛋白抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011521255.4
• 申請(qǐng)日: 2020-12-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112557672A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余旭亮;金騰川;郝洪軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 安徽恩禾生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 合肥律眾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34147
• 代理人: 趙娟

本發(fā)明屬于多肽化學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種髓鞘堿性蛋白抗體檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)所述人MBP蛋白，所述試劑盒內(nèi)包含MBP包被抗原和MBP結(jié)合抗原，所述MBP包被抗原來(lái)源于人MBP抗原表位肽(1)和(2)中的一者，并且MBP結(jié)合抗原來(lái)源于人MBP抗原表位肽(1)和(2)中的另一者。克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，通過(guò)合成特異性的人MBP抗原表位肽，使用該檢測(cè)試劑盒可以有效地檢測(cè)血液樣本中的MBP抗體的水平，操作簡(jiǎn)便、快速，并且檢測(cè)準(zhǔn)確度和精密度高，能夠迅速及時(shí)地幫助診斷病情，監(jiān)測(cè)預(yù)后。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于多肽化學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種髓鞘堿性蛋白抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

目前關(guān)于MBP-Ab病的確切致病機(jī)制尚不清楚，大部分研究認(rèn)為，識(shí)別MBP抗原的特異性B細(xì)胞可能存在于外周血，但由于骨髓中MBP抗原表達(dá)，使MBP特異性未成熟B細(xì)胞處于無(wú)反應(yīng)狀態(tài)，同時(shí)由于缺乏相應(yīng)的輔助T細(xì)胞(Th細(xì)胞)輔助作用，識(shí)別MBP的特異性B細(xì)胞不能活化，而僅在外周血中增殖。當(dāng)嗜神經(jīng)病毒感染機(jī)體時(shí)，血-腦屏障被破壞，MBP抗原漏入外周，激活CD4+T細(xì)胞，對(duì)MBP特異性B細(xì)胞募集和激活增加，產(chǎn)生大量MBP-IgG；同時(shí)促炎T細(xì)胞進(jìn)入中樞，募集MBP特異性B細(xì)胞流入中樞，產(chǎn)生相應(yīng)抗體。在一些體外實(shí)驗(yàn)中已證實(shí)MBP-IgG可以通過(guò)補(bǔ)體和抗體途徑介導(dǎo)細(xì)胞殺傷作用。而CD4+T細(xì)胞在一些細(xì)胞因子誘導(dǎo)下分化為T(mén)h1、Th17、Th9細(xì)胞，分泌TFN-γ、白細(xì)胞介素(IL)-12、IL-23、IL-17A等因子，通過(guò)趨化因子吸引不同種類(lèi)免疫細(xì)胞，如髓樣細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，誘發(fā)炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，介導(dǎo)中樞髓鞘脫失。還有研究者在表達(dá)識(shí)別MBP的特異性T細(xì)胞受體的轉(zhuǎn)基因老鼠中可以觀察到自發(fā)的視神經(jīng)炎，支持T細(xì)胞在MBP-Ab病中起重要作用。

MBP-Ab病患者的血液中MBP-Ab(抗MBP抗體)的量會(huì)有所升高，如何能夠定量、高效的檢測(cè)出MBP抗體的含量成為業(yè)內(nèi)亟待解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種髓鞘堿性蛋白抗體檢測(cè)試劑盒，克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，采用雙抗原夾心法定量檢測(cè)人MBP抗體的含量，操作簡(jiǎn)便、快速，并且檢測(cè)準(zhǔn)確度和精密度好、特異性高、靈敏度好、穩(wěn)定性好。

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下：

一種髓鞘堿性蛋白抗體檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)所述人MBP蛋白，所述試劑盒內(nèi)包含MBP包被抗原和MBP結(jié)合抗原，所述MBP包被抗原來(lái)源于人MBP抗原表位肽(1)和(2)中的一者，并且MBP結(jié)合抗原來(lái)源于人MBP抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；所述人MBP抗原表位肽(1)和(2)分別為：

(1)Gly-Lys-Gly-Arg-Gly-Leu-Ser-Leu-Ser-Arg-Phe-Ser-Trp；

(2)Lys-Arg-Gly-Ser-Gly-Lys-Asp-Ser-His-His-Phe-Ala。

進(jìn)一步，所述MBP包被抗原和MBP結(jié)合抗原通過(guò)人MBP抗原表位肽(1)和(2)分別與牛血清白蛋白偶聯(lián)制備而成。

進(jìn)一步，所述MBP包被抗原和MBP結(jié)合抗原與牛血清白蛋白的用量比為(2ng～5ng):(1mg～4mg)，且優(yōu)選為4ng:3mg。

進(jìn)一步，所述MBP包被抗原的濃度為8ng/ml～12ng/ml，且優(yōu)選為10ng/ml。

進(jìn)一步，所述MBP結(jié)合抗原的濃度為7ng/ml～9ng/ml，且優(yōu)選為8ng/ml。

進(jìn)一步，所述試劑盒內(nèi)還包括檢測(cè)緩沖液、終止液、清洗液和底物溶液。

進(jìn)一步，所述試劑盒內(nèi)還包含有酶結(jié)合物，所述酶結(jié)合物的工作濃度為1.0－2.0μg/ml，且優(yōu)選為1.5μg/ml。