[發明專利]一種新型磷脂酶A2

有效

• 申請號: 202011517458.6
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112410318B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 劉逸寒;路福平;王楠;王爽
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12N15/75;C12N1/21;C12P9/00;C11B3/00;C12R1/125;C12R1/10;C12R1/07
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

本發明屬于酶的基因工程技術領域，涉及一種來源于解淀粉芽孢桿菌的新型磷脂酶A₂及其基因、工程菌和制備方法，其技術方案是利用分子生物學手段和基因工程技術，通過菌種篩選獲得一株能夠產生磷脂酶A₂的解淀粉芽孢桿菌，通過PCR技術擴增出該新型磷脂酶A₂的基因，然后將該新型磷脂酶A₂基因，分別在枯草芽孢桿菌表達系統、地衣芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌系統中進行表達，獲得重組菌株，實現新型磷脂酶A₂的制備。同時涉及該新型磷脂酶A₂在磷脂改性如油脂脫膠、合成sn?2位特定酰基磷脂方面的應用。

技術領域：

本發明涉及一種來源于解淀粉芽孢桿菌的新型磷脂酶A₂及其基因、制備方法與應用，具體涉及通過基因工程技術和分子生物學手段獲得表達該新型磷脂酶 A₂的重組表達菌株，以及該酶在磷脂改性如油脂脫膠、合成sn-2位特定酰基磷脂方面的應用。

背景技術：

磷脂酶A₂(phospholipaseA₂，PLA₂)是一種磷脂sn-2位酰基水解酶，它能夠催化甘油磷脂的sn-2位酯鍵發生水解反應，水解產物為溶血磷脂和脂肪酸，該酶在磷脂的分解代謝中具有非常重要的作用。PLA₂不僅在生物體內具有很重要的生理功能，而且具有很高的應用價值，可廣泛地應用在科學研究、磷脂改性、油脂精練、飼料添加劑、醫療等諸多方面。

二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)屬于不飽和脂肪酸，是組成磷脂、膽固醇的重要成分。近年來大量研究顯示，EPA和DHA對維護人體健康有重要作用，EPA具有調節血脂、軟化血管，降低血液黏度的作用，可防止脂肪在血管壁的沉積，預防動脈粥樣硬化的形成和發展，預防腦血栓、腦溢血、高血壓等心血管疾病，有“血管清道夫”之稱。而DHA對腦部發育、改善視力、促進生長發育和提高人體免疫尤為重要，被稱為“腦黃金”。

磷脂(phosphatidylcholine，PC)是一類自然界中廣泛存在的功能性脂質，具有良好的理化特性和生理功能，已被廣泛應用于食品、醫藥、化妝品等行業。不同結構的磷脂具有不同的生理功能，因此，開發不同結構特性的磷脂具有非常重要的意義。磷脂改性的方法有多種，其中酶法磷脂改性反應條件溫和，條件易于控制，對環境無污染，可以專一性的催化制備目標產物，能夠保持磷脂的天然構型，并且可以大大減少有毒試劑的使用，應用酶法改性技術是未來工業發展的一個重要的方向。研究表明，同結合在甘油三酯和乙酯上的DHA和EPA 相比，結合在磷脂骨架上的DHA和EPA 生物利用率更高，抗氧化能力更強。

油脂脫膠是植物油精煉的重要工序，脫膠效果的好壞直接影響油脂的品質和精練的經濟效益。油脂脫膠包括化學法、物理法和酶法。目前，國內油脂行業普遍采用化學法，但是該方法需要消耗大量的水及酸、堿等化學物質。酶法脫膠是一種新的脫膠方法。在一定條件下，PLA₂水解植物油中的非水化磷脂生成溶血磷脂和脂肪酸，而溶血磷脂具有很強的親水性，可以通過水化作用方便地除去。同傳統的脫膠方法相比，PLA₂酶法脫膠適應性廣，反應條件溫和，可大大節約化學物質的消耗量，幾乎不產生廢水，還能提高脫膠油的產量，在環保、經濟、質量等方面具有潛在的優勢。

雖然PLA₂具有很多應用價值，但距工業生產的需要，特別是與其他酶生產和應用相比，存在很大的差距，主要原因是PLA₂酶源狹窄，目前PLA₂主要從動物胰臟、蛇毒、蜂毒中提取，也有從動物內臟或微生物中提取PLA₂，但是工藝復雜，不利于PLA₂的大量生產和利用。因此用異源表達的方式生產高活力的 PLA₂是十分必要的。