[發明專利]一種含有丁酸梭菌和乳酸片球菌的復合制劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011515468.6
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112608861B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 張婷婷;王金龍;梁晶晶;李明霞;閆舟;梁奕;張宗國
• 申請（專利權）人: 青島尚德生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K50/80;A23K10/18;A01K61/59;C12R1/145;C12R1/01
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發明公開了一種含有丁酸梭菌和乳酸片球菌的復合制劑及其制備方法和應用。所述復合制劑包括包括菌含量為5?6×10⁸CFU/mL的丁酸梭菌和菌含量為5.0?6.0×10⁹CFU/mL的乳酸片球菌，其中丁酸梭菌采用的是保藏編號為CGMCC No.14499的丁酸梭菌GBW?N1。所述復合制劑通過兩種菌株的錯時接種，并在設計的發酵培養基中發酵培養16?22h制備得到，發酵液經灌裝即可使用。所述復合制劑能夠很好的提高水產動物增重率、成活率和生長性能，有利于提高水產養殖收益，且穩定性好，便于儲藏，因此具有廣闊的應用價值。

技術領域

本發明屬于水產養殖領域，具體涉及一種含有丁酸梭菌和乳酸片球菌的復合制劑及其制備方法和應用。

背景技術

丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)是環境和動物腸道常見的革蘭氏陽性菌，丁酸梭菌菌體可在腸道粘附占位，抑制病原菌；乳酸片球菌繁殖代謝中可以產生乳酸片球菌素和L-乳酸等益生物質，在腸道菌群平衡調節中起到重要作用。而目前由這兩種參與制備的微生物菌劑主要遇到的問題是固體產品生產成本仍偏高，限制了使用頻率；而液體產品因保存不穩定，造成不能大規模應用。因此，研發一種可以高效規模化生產、在運輸和保存中穩定性高的產品，對厭氧菌在水產養殖中的應用具有非常重要的意義。

發明內容

本發明提供了一種含有丁酸梭菌和乳酸片球菌的復合制劑及其制備方法和應用，所述復合制劑通過培養條件摸索，具有很好的穩定性，便于儲藏，且能夠很好的提高水產動物生長性能。

為實現上述發明目的，本發明通過下述技術方案予以實現：

本發明提供了一種含有丁酸梭菌和乳酸片球菌的復合制劑，所述復合制劑包括菌含量為5-6×10⁸CFU/mL的丁酸梭菌和菌含量為5.0-6.0×10⁹CFU/mL的乳酸片球菌。

進一步的，所述丁酸梭菌采用的是保藏編號為CGMCC No.14499的丁酸梭菌GBW-N1。

進一步的，所述復合制劑具有很好的穩定性。

本發明還提供了所述的復合制劑的制備方法，所述制備方法的具體步驟如下：

(1)將丁酸梭菌、乳酸片球菌分別在種子培養基中進行活化培養，得到丁酸梭菌種子液、乳酸片球菌種子液；

(2)先將所述丁酸梭菌種子液接種到發酵罐中，37℃在發酵培養基中發酵4-5h后，再將所述乳酸片球菌種子液接種到發酵罐中，37℃共培養16-22h，得到所述復合制劑，灌裝備用。

進一步的，所述丁酸梭菌種子液的接種量為2％；所述乳酸片球菌種子液的接種量為2％。

進一步的，所述發酵培養基的配方為胰蛋白胨6～12g/L、牛肉膏5～10g/L、酵母膏5～15g/L、葡萄糖20～30g/L、磷酸氫二鉀2～5g/L、硫酸鎂0.1～0.3g/L、乙酸鈉1～3g/L、半胱氨酸鹽酸鹽0.5～1g/L，碳酸鈣10～20g/L，pH 6.8～7.0。

進一步的，所述步驟(2)中發酵的條件：高純氮氣控制罐體壓力為0.05MPa，轉速為80-100r/min，采用氫氧化鈉溶液或氨水控制發酵培養基的pH≥6.0。

本發明還提供了所述的復合制劑在用于制備提高水產動物生長性能的微生物制劑中的應用。

進一步的，在應用時，將所述復合制劑以20-30mL/kg飼料的用量拌服在水產動物的養殖飼料中，連續飼喂30天以上。

進一步的，所述復合制劑能夠增加水產動物的增重率和成活率，并降低餌料系數。

進一步的，所述復合制劑能夠增加水產動物腸道絨毛數量、上皮細胞密度和血清中的堿性磷酸酶含量。