[發(fā)明專利]抗人程序死亡因子-1單克隆抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011513474.8
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN113004408B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 路力生;霍永庭;符俊;李凡;龔春喜;潘志福
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東菲鵬制藥股份有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 高麗娜

本發(fā)明提供了人PD?1抗體、其抗原結(jié)合片段及其醫(yī)藥用途。還提供了包含所述抗體CDR區(qū)的嵌合抗體、包含人PD?1抗體及其抗原結(jié)合片段的藥物組合物，以及所述抗體在制備用于治療疾病或病癥的藥物中的用途。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及免疫學(xué)領(lǐng)域。具體涉及鼠抗人程序死亡因子-1(PD1)單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

程序死亡因子-1(PD1)是CD28家族成員，在活化的B細(xì)胞，T細(xì)胞及髓樣細(xì)胞上表達(dá)。人PD1由基因Pdcd1編碼，位于2q37.3，全長9.6kb，由5個外顯子和4個內(nèi)含子組成，其上游包含663bp的啟動子。PD1為55KDa的I型跨膜蛋白，分子結(jié)構(gòu)由胞外區(qū)，跨膜區(qū)及胞內(nèi)區(qū)組成，胞外區(qū)含有一個免疫球蛋白可變區(qū)IgV結(jié)構(gòu)域，胞內(nèi)區(qū)含有免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)和免疫受體酪氨酸轉(zhuǎn)換作用模塊(ITSM)。PD-1胞外區(qū)氨基酸序列和CTLA-4有24％的同源性，與CD28有28％的同源性。在T細(xì)胞被激活后，PD-1主要通過ITIM將酪氨酸磷脂酶SHP2集合，導(dǎo)致下游效應(yīng)分子去磷酸化。

PD-1有兩個配體：PD-L1和PD-L2。PD-L1和PD-L2都是B7同源物，PDL基因位于人染色體9P24.2位點，大小為42kb，其分子結(jié)構(gòu)均包含一個免疫球蛋白樣可變區(qū)結(jié)構(gòu)域，一個恒定區(qū)樣結(jié)構(gòu)域，一個跨膜區(qū)和一個短的胞質(zhì)尾巴。

PD-1與PD-L1和PD-L2結(jié)合后可下調(diào)T細(xì)胞的活化。PD-L1表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞表面，這些腫瘤細(xì)胞包括：肺癌，胃癌，肝癌，食道癌，腎癌，卵巢癌，宮頸癌，乳腺癌，皮膚癌，結(jié)腸癌，膀胱癌，神經(jīng)膠質(zhì)癌，頭頸癌，口腔鱗狀細(xì)胞癌。而且這些癌癥周邊發(fā)現(xiàn)大量表達(dá)PD-L1的CD8+T細(xì)胞，臨床結(jié)果統(tǒng)計顯示，PD-L1在腫瘤細(xì)胞上的高表達(dá)水平與癌癥患者不良預(yù)后有關(guān)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有抗體結(jié)合PD-1的親和力和特異性不高，不能有效阻斷PD-1與PD-L1、PD-L2結(jié)合的缺陷和不足，提供了新的能高效結(jié)合PD-1并能阻斷PD-1與PD-L1和PD-L2結(jié)合的抗體，鼠單抗在SEB超抗原刺激PBMC及混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實驗(MLR)中，更能促進(jìn)T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL2和IFNγ。

本發(fā)明提供了抗PD1的單克隆抗體。具體地，本發(fā)明提供了以下幾個方面：

1.抗PD1的抗體或其抗原結(jié)合片段，包含選自以下各項組成的組的重鏈CDR1-3和輕鏈CDR1-3：

(1)HCDR1：由SEQ ID NO：8的序列表示；HCDR2：由SEQ ID NO：9的序列表示；HCDR3：由SEQ ID NO：10的序列表示；

LCDR1：由SEQ ID NO：20的序列表示；LCDR2：由SEQ ID NO：21的序列表示；LCDR3：由SEQ ID NO：22的序列表示；

(2)HCDR1：由SEQ ID NO：12的序列表示；HCDR2：由SEQ ID NO：13的序列表示；HCDR3：由SEQ ID NO：14的序列表示；

LCDR1：由SEQ ID NO：24的序列表示；LCDR2：由SEQ ID NO：25的序列表示；LCDR3：由SEQ ID NO：26的序列表示；

(3)HCDR1：由SEQ ID NO：16的序列表示；HCDR2：由SEQ ID NO：17的序列表示；HCDR3：由SEQ ID NO：18的序列表示；

LCDR1：由SEQ ID NO：28的序列表示；LCDR2：由SEQ ID NO：29的序列表示；LCDR3：由SEQ ID NO：30的序列表示。

2.上述1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包括：

(1)重鏈可變區(qū)，其包含下述序列或由下述序列組成：

SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，和