[發明專利]一種從兔的新鮮小腸中快速提取α-葡萄糖苷酶的方法

在審

• 申請號: 202011509915.7
• 申請日: 2020-12-19
• 公開（公告）號: CN112322603A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 伊日布斯;高茜;毛澤楠;劉彥敏;王康
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24
• 代理公司: 昆明同聚專利代理有限公司 53214
• 代理人: 蘇蕓蕓

本發明公開了一種從兔的新鮮小腸中快速提取α?葡萄糖苷酶的方法，該方法采用兔的新鮮小腸為原料，收集小腸的腸粘液及腸粘膜，加入弱酸鹽緩沖液，高速勻漿后，低溫靜置，離心收集上清液；在上清液中再加入弱酸鹽緩沖液，低溫靜置，離心分離后取上清液，即得含α?葡萄糖苷酶的提取液；本發明方法制得的酶提取液比活力為6U/mg，接近商業酶的比活力，且在0℃和?80℃保存3個月的酶酶活基本保持穩定；與商業酶相比，阿卡波糖對本發明酶提取液具有更高的抑制活性，證明兔小腸源的α?葡萄糖苷酶提取體系有效；與價格昂貴，貨期長的商業酶相比，本發明制得的α?葡萄糖苷酶安全環保，提取工藝簡單且成本低，適于工業化生產和市場推廣應用。

技術領域

本發明屬于酶制品制備技術領域，具體涉及一種從兔的新鮮小腸中快速提取α-葡萄糖苷酶的方法。

背景技術

葡萄糖苷酶是糖苷水解酶大家族中的一大類酶，主要功能為水解葡萄糖苷鍵，釋放出葡萄糖，是生物體糖代謝途徑中不可或缺的一類酶。根據水解糖苷鍵的類型，可將葡萄糖苷酶分為α-葡萄糖苷酶（α-glucosidase）和β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase）。α-葡萄糖苷酶主要包括麥芽糖酶、蔗糖酶、異構麥芽糖酶、乳糖酶等酶類，廣泛分布在小腸絨毛粘膜細胞刷狀緣中，參與機體食物的消化、糖蛋白的生物合成、多糖及糖復合物的合成與分解代謝等多個生物過程；α-葡萄糖苷酶廣泛存在于自然界各種生物體內，例如：葡萄、甜玉米、稻谷、果蠅、黑曲霉和釀酒酵母。

目前，常見的提取α-葡萄糖苷酶的方法主要是從小麥或成熟的人克隆結腸腺癌細胞（Caco-2細胞）中提取α-葡萄糖苷酶。此外，還有利用基因工程技術構建表達載體增加α-葡萄糖苷酶基因拷貝數，獲得高效表達α-葡萄糖苷酶的重組菌株。目前，國內所需的α-葡萄糖苷酶需依賴進口，市場上的多種 α-葡萄糖苷酶主要來源于微生物的代謝產物，與哺乳動物腸道內的α-葡萄糖苷酶有一定的差異性，且價格昂貴，貨期長，造成不便。

大量研究表明動物小腸中具有豐富的α-葡萄糖苷酶，用于提取α-葡萄糖苷酶具有很好的實用前景；從哺乳動物小腸中提取α-葡萄糖苷酶的研究并不多。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種從兔的新鮮小腸中快速提取α-葡萄糖苷酶的方法，采用離心分離技術，達到工藝簡單，提取效率高，酶活損失小，對環境無污染的目的。

本發明方法采用兔的新鮮小腸為原料，收集小腸的腸粘液及腸粘膜，加入弱酸鹽緩沖液，高速勻漿后，低溫靜置，離心收集上清液；在上清液中再加入弱酸鹽緩沖液，低溫靜置，離心分離后取上清液，即得含α-葡萄糖苷酶的提取液。

本發明方法的具體操作為：

（1）兔的新鮮小腸預處理：選取兔小腸，用無菌的解剖刀在0 -10℃的低溫環境下刮取腸粘膜及腸粘液并收集；

小腸是在兔子處死后0-4 h內獲得且0-10℃運輸和儲存；

（2）往腸粘膜及腸粘液中加入其體積1-10倍的0.1-0.6 mol/L弱酸鹽緩沖液，高速勻漿2-30min，0-10℃靜置2 -20 h，然后在4℃下4000-10000 g離心5-30 min，收集上清液；

（3）按體積比為1:1-5的比例，將上述上清液與0.1mol/L弱酸鹽緩沖液混合，0-10℃靜置2-20 h，在4℃下4000-10000g離心5-30min，去沉淀，收集上清液，即得含α-葡萄糖苷酶的提取液；

（4）測定步驟（3）提取液的α-葡萄糖苷酶酶活，以及提取液在不同溫度下的穩定性，并檢測了阿卡波糖對本發明方法制得的酶提取液的抑制率，實驗結果顯示本發明方法提取獲得的酶液活力與商業酶活力接近，酶活穩定性良好，實驗結果也表明本發明方法簡單有效。

本發明的優點和技術效果：