[發明專利]一種肺炎支原體及其耐藥突變的引物探針組合及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011509193.5
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112458194A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 陳贊;李進福;高利飛;蘭定云;麥艷娜;李振紅;王瑋;付光宇
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6848;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/35
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種肺炎支原體及其耐藥突變的引物探針組合及檢測試劑盒。該引物探針組合包括：如SEQ ID NO：1～2所示的肺炎支原體的特異性引物對；如SEQ ID NO：3所示的肺炎支原體敏感型的檢測探針；如SEQ ID NO：4所示的肺炎支原體2063位點耐藥突變的檢測探針；和如SEQ ID NO：5所示的肺炎支原體2064位點耐藥突變的檢測探針。本發明引物和探針具有良好的特異性，結合real time PCR檢測方法，能夠實現對肺炎支原體及其耐藥突變的快速、準確、靈敏的鑒定和耐藥比例的計算。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種肺炎支原體及其耐藥突變的引物探針組合及檢測試劑盒。

背景技術

肺炎支原體(MP)是人類的一種重要病原菌，可引起社區感染。近年來，隨著抗生素的廣泛使用，有些肺炎支原體對四環素類抗生素產生抗藥性，耐藥性增強現象越來越引起人們的重視。

肺炎支原體的檢測方法多種多樣，分離培養是微生物檢測的“金標準”，該法雖然可靠，但耗時、費力不能滿足快速檢測的需要，常用的免疫熒光法雖然具有一定特異性和敏感性，但由于抗體的種類和濃度的影響，結果不穩定，有時會出現假陽性。為克服上述問題，多重熒光定量RT-PCR技術被用來診斷肺炎支原體及其耐藥性的感染，這種方法具有快速、敏感、特異性強等特點，探針能夠區分敏感型和耐藥型并能計算耐藥菌比例，大大地提高了檢測效率。

但是目前，針對肺炎支原體及其耐藥性鑒定的引物探針的設計存在不合理的現象，導致多數檢測試劑無法實現準確、快速、靈敏的檢測。如授權公告號CN 102002522 B發明的引物探針檢測靈敏度為100Copies/ml。公布號CN 106191239 A發明的引物探針檢測靈敏度為1000Copies/ml，在檢測過程中需要分3管分別進行檢測，工作量大且檢測通量低。公布號CN 103820557 A發明的引物探針只能進行敏感株和2063位點突變株檢測。且上述三件專利方法均無法判斷肺炎支原體混合感染的耐藥比例。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種肺炎支原體及其耐藥突變的引物探針組合及檢測試劑盒。引物探針組合對肺炎支原體敏感型和突變型的最低檢測限均為50copies/mL，且可以判斷肺炎支原體混合感染的耐藥比例。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種引物探針組合，其包括：

如SEQ ID NO：1～2所示的肺炎支原體的特異性引物對；

如SEQ ID NO：3所示的肺炎支原體敏感型的檢測探針；

如SEQ ID NO：4所示的肺炎支原體2063位點耐藥突變的檢測探針；

和如SEQ ID NO：5所示的肺炎支原體2064位點耐藥突變的檢測探針。

本發明中肺炎支原體的引物和探針用于對肺炎支原體定性，不論是耐藥型肺炎支原體還是23sRNA敏感型的肺炎支原體，都能夠被該引物或探針檢測。

在本發明中，針對不同的肺炎支原體株型，SEQ ID NO：1～2所示引物對擴增的片段如SEQ ID NO：9～11所示。

如SEQ ID NO：9所示擴增的片段為肺炎支原體敏感型；

如SEQ ID NO：10所示擴增的片段為肺炎支原體2063突變型；

如SEQ ID NO：11所示擴增的片段為肺炎支原體2064突變型。

作為優選，引物探針組合還包括：

如SEQ ID NO：6～7所示的內標擴增引物對；

如SEQ ID NO：8所示的內標探針。