[發明專利]一種抗菌肽及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202011507335.4
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112521456B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 樊倩;朱小清;馬尚威;周通;張敬學;吳有林
• 申請（專利權）人: 福建傲農生物科技集團股份有限公司;廣州傲農生物科技有限公司;金華傲農生物科技有限公司;泰和傲昕烏雞發展有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/20;C07K1/14;A23K50/30;A23K50/60;A23K20/147
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

1.一種抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽具有如SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列，分子量為1555Da，等電點為12.18；

所述抗菌肽的制備方法，包括如下步驟：

S1、將抗菌肽按SEQ ID NO.1所述序列信息進行合成，然后加無菌純化水稀釋至45~55μg/mL，得氨基酸溶液；

S2、將步驟S1制得的氨基酸溶液經HPLC反相柱層析脫鹽純化，即得。

2.如權利要求1所述的抗菌肽，其特征在于，步驟S1所述的合成過程為經全自動多肽合成儀合成抗菌肽全序列。

3.如權利要求1所述的抗菌肽，其特征在于，步驟S2所述HPLC反相柱層析脫鹽純化的具體操作過程為：

（1）流動相配置：配置緩沖液A和緩沖液B各1L，在備好的量筒中用Teflon包被的磁轉子將溶液攪拌均勻，用0.2μm PTEE過濾器過濾緩沖液A和B，將洗脫液瓶用塞子封閉，以防止有機溶劑揮發；所述緩沖液A為質量分數為0.1%的三氟乙酸水溶液；所述緩沖液B為含0.09%三氟乙酸的2-丙醇溶液；

（2）抗菌肽樣品的制備：先檢測樣品的純度，如果存在不溶顆粒，用0.2μm PTEE濾膜過濾；

（3）用RP-HPLC進行脫鹽純化：

①檢測HPLC系統：

a、用洗脫液A進空白樣，先在100%洗脫液A中等梯度洗脫，再在100%洗脫液B中梯度洗脫；

b、用硫脲或硝酸鈉來測量柱的死體積，從而確定洗脫時間；

②蛋白質脫鹽

a、將含鹽樣品注入反相柱中，按照流速為2.5mL/min，用100%洗脫液A洗脫3min，鹽洗脫時間為柱的死時間，

b、用100%洗脫液B一步洗脫洗脫蛋白3min，收集得到的蛋白質組分。

4.一種如權利要求1所述的抗菌肽在制備飼料添加劑中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述抗菌肽在飼料添加劑中的加入量為25~200mg/kg。