[發明專利]一種轉基因抗蟲優質高衣分棉花新品系的培育方法

在審

• 申請號: 202011506486.8
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112655545A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 鐘文娟;牟方生;陳正杰;陳四維;周永航;戢沛城;楊澤湖;蔣理;石盛佳;宛永璐;毛正軒;王小強
• 申請（專利權）人: 四川省農業科學院經濟作物育種栽培研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

1.一種轉基因抗蟲優質高衣分棉花新品系的培育方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)以轉基因抗蟲優質棉花品系為母本，以轉基因高衣分品系為父本進行雜交，得轉基因抗蟲雜交組合F₁；

(2)以所述轉基因抗蟲雜交組合F₁為母本，以所述轉基因抗蟲優質品系為父本進行雜交，得回交一代BC₁F₁；

(3)以所述回交后代中具有轉基因高衣分基因的植株為母本，以所述轉基因抗蟲優質棉花品系為輪回親本，進行回交，連續回交五代，得回交六代BC₆F₁；

(4)對所述回交六代BC₆F₁中具有轉基因高衣分基因的植株進行自交，單株收獲，得BC₆F₂；

(5)篩選所述BC₆F₂中所有植株都抗蟲的抗蟲株行中具有轉基因高衣分基因的植株進行自交，單株收獲，得BC₆F₃；

(6)篩選所述BC₆F₃中所有植株都抗蟲且具有轉基因高衣分基因的株行進行自交繁殖，株行收獲評價篩選，得轉基因抗蟲優質高衣分棉花新品系。

2.根據權利要求1所述培育方法，其特征在于，步驟(1)中所述母本包括金陸長1號；所述父本包括IF1-1。

3.根據權利要求1所述選育方法，其特征在于，所述轉基因高衣分材料IF1-1含有FBP7::iaaM基因。

4.根據權利要求3所述培育方法，其特征在于，所述高衣分基因FBP7::iaaM的PCR鑒定引物包括IF-up、IF-dn1和IF-dn2；且所述IF-up的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述IF-dn1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，IF-dn2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

5.根據權利要求4所述培育方法，其特征在于，所述PCR鑒定的體系以25μL計，包括：5×PrimeSTAR緩沖液5μL、dNTP 2μL、上游引物和下游引物各1μL、棉花gDNA 10～200ng、PrimeSTAR DNAPolymerase 0.5U和余量的水。

6.根據權利要求4或5所述培育方法，其特征在于，所述PCR鑒定的程序包括：98℃變性10sec，56℃退火5sec、72℃延伸60sec，32循環。

7.根據權利要求1所述培育方法，其特征在于，步驟(1)～步驟(5)中抗蟲性的篩選方法，包括：在棉苗5～7葉期，以質量百分濃度為0.8％的硫酸卡拉霉素溶液涂抹才展開的葉片，若葉片不變色則鑒定該植株具有抗蟲性，若變色則不具有抗蟲性。