[發明專利]一種檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的引物組合物和試劑盒以及應用

在審

• 申請號: 202011506329.7
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112522443A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 馮力;石達;時洪艷;陳建飛;張鑫;劉建波
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所(中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 王志新

本發明提供了一種檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的引物組合物和試劑盒以及應用，屬于生物技術領域。本發明的目的是解決提高檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的準確性、速度、靈敏性和穩定性的技術問題。本發明提供了一種檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的引物組合物，所述引物組合物由以下序列組成：FIP引物、BIP引物、F3引物和B3引物，檢測的步驟為提取檢測樣本的RNA，然后進行RT?LAMP反應，本發明建立的RT?LAMP檢測方法可以用于臨床樣本的檢測，且較普通RT?PCR更加快速和簡便，比RT?PCR方法的靈敏性高10³倍。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的引物組合物和試劑盒以及應用。

背景技術

2017年中國南方首次出現并報道豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒(Swine acutediarrhea syndrome coronavirus，SADS-CoV)，可引起新生仔豬嚴重的急性腹瀉，嘔吐和脫水，最終因體重急劇減輕而導致死亡。5日齡以內的仔豬病死率可達到90％以上，成年母豬感染后臨床癥狀較輕微，且后期可逐漸恢復。組織病理學檢查可觀察到小腸絨毛嚴重的萎縮和脫落。經研究發現，該病毒的基因組結構與蝙蝠冠狀病毒HKU-2的基因組結構相似，主要包括開放閱讀框ORF1a/1b，結構蛋白S、E、M、N以及非結構蛋白等。SADS-CoV的臨床癥狀與PEDV，TGEV，PDCoV等引起的臨床癥狀極為相似，目前僅能通過實驗室檢測方法才能鑒定，包括病毒分離，間接ELISA和熒光定量RT-PCR等，因此建立一種高效靈敏快速的檢測方法對SADS-CoV感染的防控具有重要意義。對SADS-CoV的診斷主要有病毒分離、免疫組化、免疫熒光或RT-PCR方法，但這些診斷方法不僅存在耗時長、成本高，對設備要求高等缺點，且不便于豬場臨床的快速確診和應用。因此，亟需建立現場快速診斷的方法。

發明內容

本發明的目的是為了建立快速有效的檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的方法，為了解決如何提高檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的準確性、速度、靈敏性和穩定性的技術問題，本發名提供了一種檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的引物組合物，所述引物組合物由以下序列組成：FIP引物、BIP引物、F3引物和B3引物；所述FIP引物序列為5’-CGACCCAATGCACACCCTGAATTTGGTACTGGTCCTCACGC-3’，所述BIP引物序列為5’-AACTAGCCCCACAGGTCTTGGTCCCAAACTGAGGTGTAGCAG-3’，所述F3引物序列為5’-CAGCCTTCTAACTGGCACTT-3’，所述B3引物序列為5’-ACAGTCAGGTCTGGTGGTAA-3’。

本發明還提供了上述的檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的引物組合物在制備豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒檢測產品中的應用。

本發明還提供了一種檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的試劑盒，所述試劑盒包括上述的檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的引物組合物。

進一步地限定，所述引物組合物中FIP引物和BIP引物的濃度均為1.4μM，所述引物組合物中F3引物和B3引物的濃度均為0.2μM。

進一步地限定，所述試劑盒還包括陰性制品、陽性制品、反應液和SYBR Green I熒光染料；所述陰性制品為水；所述陽性制品為豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的RNA。

進一步地限定，所述反應液為WarmStart LAMP 2×Master Mix。

本發明還提供了上述檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的試劑盒在制備豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒檢測產品中的應用。