[發明專利]聚酮類化合物lithocarpin E-G及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011504877.6
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112592350B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 劉洪新;陳玉嬋;章衛民;許建林;李賽妮
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）
• 主分類號: C07D493/18
• 分類號: C07D493/18;A61K31/365;A61P35/00;C12P17/18;C12R1/645
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 陳潔娣;劉明星

1.如式（?）所示的化合物lithocarpin E-G：

式（?）；

其中，1為化合物lithocarpin E、2為化合物lithocarpin F、3為化合物lithocarpinG。

2.一種權利要求1所述的化合物lithocarpin E-G的制備方法，其特征在于，所述的化合物lithocarpin E-G是從海洋真菌Phomopsis lithocarpus FS508的發酵培養物中分離制備得到的，具體包括以下步驟：

（1）制備海洋真菌Phomopsis lithocarpus FS508的固體發酵培養物，用乙酸乙酯萃取該固體發酵培養物，將乙酸乙酯萃取液經濃縮后得浸膏，將浸膏用甲醇水溶液分散，再用石油醚萃取，萃取剩下的甲醇水溶液部分蒸餾濃縮得到粗提物；

（2）將粗提物過硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯以體積比為10:1, 7:1, 9:2, 2:1,1:1, 0:1和二氯甲烷-甲醇以體積比為5:1, 0:1分別作為洗脫劑，梯度洗脫，收集石油醚-乙酸乙酯體積比1:1和0:1洗脫獲得的且經TLC薄層層析以正己烷：乙酸乙酯=1:1 v/v展開得Rf=0.3-0.7的組分Fr.9；

將組分Fr.9再經C18反相柱層析，以甲醇-水的體積比為30:70; 40:60; 50:50; 60:40; 70:30; 80:20; 90:10; 100:0進行梯度洗脫，收集甲醇-水體積比80:20洗脫組分，得到組分Fr.9.6，Fr.9.6再經硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯的體積比為3:1, 2:1, 1:1,1:2, 0:1進行梯度洗脫，收集石油醚-乙酸乙酯體積比0:1洗脫的組分Fr.9.6.6；將組分Fr.9.6.6經凝膠柱層析Sephadex LH-20，以二氯甲烷-甲醇體積比1:1作為洗脫劑洗脫，收集TLC薄層層析以正己烷：乙酸乙酯=1:1 v/v展開得Rf=0.3-0.4的組分Fr.9.6.6.1和以正己烷：乙酸乙酯=1:1 v/v展開得Rf=0.5-0.6的組分Fr.9.6.6.2；將組分Fr.9.6.6.1和Fr.9.6.6.2分別經HPLC分離純化，得到化合物lithocarpin E-G；

所述的將組分Fr.9.6.6.1和Fr.9.6.6.2分別經HPLC分離純化具體為：將組分Fr.9.6.6.1半制備HPLC，使用YMCpack ODS-A/AQ柱，流動相為體積比86:14的甲醇/水，流速為3 mL/min，收集保留時間為9 min的洗脫組分，得到化合物lithocarpin F，收集保留時間為12.4 min的洗脫組分，得到化合物lithocarpin G；

將組分Fr.9.6.6.2先經全制備HPLC，使用YMC ODS-A柱，流動相為體積比90:10的甲醇/水，流速為8 mL/min初步純化，再進一步的半制備HPLC，使用YMCpack ODS-A/AQ柱，流動相為體積比80:20的甲醇/水，流速為3 mL/min，收集保留時間為11.4 min的洗脫組分，得到化合物lithocarpin E。

3. 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（1）制備海洋真菌Phomopsis lithocarpus FS508的固體發酵培養物具體步驟為：挑取FS508的菌絲接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養基中，在28℃、120 r/min條件下培養5天，制得種子液，然后將種子液按0.1 mL/g的接種量接種于大米培養基中，28℃條件下培養30天，制得FS508的固體發酵培養物，所述的馬鈴薯葡萄糖液體培養基，每升是通過以下方法配制的：用500 mL的純水煮200 g的馬鈴薯，煮沸20 min，過濾得馬鈴薯汁，再加入葡萄糖20 g、KH₂PO₄ 3 g、MgSO₄ 1.5g、維生素B₁ 10 mg，用水補足至1000 mL，滅菌制得；所述的大米培養基是通過以下方法配制的：按每480 g大米與600 mL質量體積比為0.5% g/mL的粗海鹽水溶液混合滅菌制得。