[發(fā)明專利]一種烏拉爾醇在體外促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化方面的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011504331.0
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112592891B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發(fā)明（設計）人: 郭守山;郭守河
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江省恒生干細胞工程有限公司;銀豐生物工程集團有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0775
• 代理公司: 杭州寒武紀知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33271
• 代理人: 張志南

本發(fā)明公開了一種烏拉爾醇在體外促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化方面的應用。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)烏拉爾醇具有促進hASCs成骨分化的作用，可以用于體外促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化，用于制備促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化體外培養(yǎng)基。

技術領域

本發(fā)明屬于生物領域，涉及干細胞體外誘導分化，具體涉及一種烏拉爾醇在體外促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化方面的應用。

背景技術

組織工程技術已成為骨缺損修復最有前途的治療方法之一。人脂肪間充質(zhì)干細胞(hASCs)作為間充質(zhì)干細胞的一個重要來源，在骨組織工程中受到廣泛關注。利用誘導劑體外培養(yǎng)hASCs促進其定向分化是獲得骨組織工程細胞的重要途徑。但是，目前這類誘導劑較少。

烏拉爾醇(Uralenol，CAS登錄號：139163-15-8)為一種較為常見的化合物，在多種植物中均存在，其化學結(jié)構(gòu)如下：

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于一種烏拉爾醇在體外促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化方面的應用。

實現(xiàn)本發(fā)明上述目的技術方案如下：

一種烏拉爾醇在體外促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化方面的應用。

一種烏拉爾醇在制備體外促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化的培養(yǎng)基方面的應用。

一種烏拉爾醇體外培養(yǎng)hASCs促進其向成骨細胞分化進而獲得骨組織工程細胞用于治療骨組織疾病的用途。

本發(fā)明的突出優(yōu)點：

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)烏拉爾醇具有促進hASCs成骨分化的作用，可以用于體外促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化，用于制備促進人脂肪間充質(zhì)干細胞成骨分化體外培養(yǎng)基。

附圖說明

圖1為倒置顯微鏡觀察的hASCs細胞形態(tài)；

圖2中A為茜素紅染色圖；B為PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖；C為hASCs總蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳圖。

具體實施方式

下面就結(jié)合實施例具體介紹本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，由于篇幅原因，實驗過程的描述無法做到非常詳細，凡是實驗中未詳細描述的部分均為本領域技術人員熟知的常規(guī)操作。

一、實驗材料

L-DMEM培養(yǎng)基購自Thermo，胎牛血清購自GIBCO。

雙抗、茜素紅購自Sigma，Trizol試劑購自Invitrogen，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶購自TaKaRa。

烏拉爾醇購自寶雞市辰光生物科技有限公司，純度98％。

二、實驗方法

1、hASCs分離培養(yǎng)和鑒定

將皮下脂肪抽吸液裝入離心管，加入適量Ⅰ型膠原酶于37℃恒溫搖床消化1h，加入等體積L-DMEM培養(yǎng)基終止消化，1500r/min離心10min，棄上清。將沉淀用適量L-DMEM培養(yǎng)基吹打混勻，200目網(wǎng)過濾，收集濾液，1000r/min離心5min，棄上清。將沉淀用適量含10％胎牛血清和1％雙抗的L-DMEM培養(yǎng)基吹打混勻，轉(zhuǎn)入細胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃、體積分數(shù)為5％CO₂、飽和濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)、傳代。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。

2、hASCs分組和誘導培養(yǎng)

將生長狀態(tài)良好的第3代hASCs分成對照組和誘導組，對照組使用含10％胎牛血清和1％雙抗的L-DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，誘導組使用含20μg/mL烏拉爾醇、10％胎牛血清和1％雙抗的L-DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。

3、茜素紅染色法鑒定成骨分化