[發明專利]膠凍芽孢桿菌的高效發酵工藝

在審

• 申請號: 202011502907.X
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112980716A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 陳衍學;劉雄濤;雍思龍;萬順;孫玲;鄧文芬
• 申請（專利權）人: 湖北綠天地生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 陳萬江

1.膠凍芽孢桿菌的高效發酵工藝，其特征在于：包括以下步驟：

S1，分離到產膠凍芽孢桿菌，篩選菌株；

S2，制作斜面及平板測定培養基：按重量，將2g～8g的蔗糖、0.5g～4g的磷酸氫二鈉、0.1g～0.7g的硫酸鎂、0.002g～0.007g的三氯化鐵、0.05g～0.15g的碳酸鈣、0.04g～0.08g的黃腐殖酸鉀、14g-22g的瓊脂肪和1000ml蒸餾水制作成斜面及平板測定培養基，調整pH為7.3-7.7；

S3，制作三角瓶發酵培養基：按重量，將1g～3g糖蜜、0.24g～0.7g豆粕粉、0.05g～0.15g硫酸鎂、0.03g～0.08g磷酸氫二鉀彈、0.05g～0.15g碳酸鈣和80g～100g水制作成三角瓶發酵培養基，調整pH為7.3-7.7；

S4，將膠凍芽孢桿菌按5％的體積比接種到步驟S2制得的斜面及平板測定培養基中進行菌種活化，活化溫度為28～33℃，活化時長24h，直至得到膠凍芽孢桿菌發酵液；

S5，將步驟S4中活化完成的菌種接種到步驟S3中制得的三角瓶發酵培養基中發酵培養；

S6，在步驟S5發酵結束時，向膠凍芽孢桿菌發酵液中添加1％～2％體積的殼聚糖，并靜止5～8小時后，去除上部清液，即得到高密度膠凍芽孢桿菌菌液；

S7，將步驟S6中發酵培養完成的膠凍芽孢桿菌進行活菌數測定。

2.根據權利要求1所述的膠凍芽孢桿菌的高效發酵工藝，其特征在于：所述步驟S1還包括以下步驟：

S01，土壤菌懸液獲得：將鋁土礦樣加入到無菌水中，振蕩后靜置，取上清液加入到液體無氮培養基中；

S02，富集培養：將步驟S01中由液體無氮培養基培養所得菌種于液體無氮培養基中進行轉接培養，共轉接4次，轉接量按體積百分比計，每次培養液的10％接種于鋁土礦含量逐漸增加的液體培養基中；

S03，分篩培養：將步驟S02中的最后一次轉接培養的培養液稀釋103-105倍后，涂布于固體無氮培養基中，置于35℃恒溫培養箱中培養24h，待平板表面不再有水滴時，倒置平板，培養3-5天，隨時觀察細菌菌落生長情況；根據菌落長出的時間以及菌落的形態，從培養基平板上挑出黏液狀凸起的透明菌落，進行再培養，直到獲得純培養；

S04，復篩：將步驟S03中得到的純菌種接種于液體含氮培養基中，能夠分解硅酸鹽和鋁硅酸鹽組成的巖石礦物的細菌即為膠凍芽孢桿菌。

3.根據權利要求2所述的膠凍芽孢桿菌的高效發酵工藝，其特征在于：所述膠凍芽孢桿菌的鑒定方法為：用硅鉬藍法測定溶液中硅含量。

4.根據權利要求1所述的膠凍芽孢桿菌的高效發酵工藝，其特征在于：步驟S5中三角瓶發酵培養液的裝液量采用60mk/500ml三角瓶。

5.根據權利要求1所述的膠凍芽孢桿菌的高效發酵工藝，其特征在于：步驟S5中的發酵培養條件為32～34℃恒溫箱中培養60～70h。

6.根據權利要求1所述的膠凍芽孢桿菌的高效發酵工藝，其特征在于：步驟S5中的培養采用恒溫搖瓶培養方式。

7.根據權利要求1所述的膠凍芽孢桿菌的高效發酵工藝，其特征在于：所述步驟S7中活菌數測定采用平板稀釋法測定。