[發明專利]一種植物開放組培方法及專用培養基

有效

• 申請號: 202011500516.4
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112493133B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 劉澤洋
• 申請（專利權）人: 青島澤欣農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州知管通專利代理事務所(普通合伙) 33288
• 代理人: 尉敏

本發明屬植物生物技術領域，具體涉及在植物開放組培中進行培養瓶敞口培養的方法及專用培養基。在配制開放式組織培養基時，培養基各組分分裝到培養瓶后，投入氧氣緩釋顆粒，平放冷卻凝固，培養基接種芽苗外植體后，在培養基表面灌注一層非揮發性油性液體，敞口培養。本發明加強瓶苗光合作用，得到健壯瓶苗，降低蒸騰作用，提高瓶苗移栽成活率，本發明還可減少培養基抗菌劑使用量，抑制培養基過度酸化。本發明成本低，制備簡單，應用方便，效果顯著。

技術領域

本發明屬植物生物技術領域。涉及一種植物開放組培方法及專用培養基，具體涉及在植物開放組培中瓶口敞開培養以改善瓶苗氣體微環境的方法。

背景技術

植物組織培養技術種苗生產、脫除病毒、種質改良等具有廣闊的市場前景。近年引起廣泛關注的植物開放式組織培養（開放組培），是在培養基添加抗菌劑，不需高壓滅菌，在開放環境(不需超凈臺)接種, 加蓋常規培養。開放組培在提高操作效率、降低組培成本意義重大，相關論文（劉福平.植物抗菌組培中抗菌劑應用的研究方法. 基因組學與應用生物學，2014， 33（4）：910-915，前言）和專利申請日益增多，如申請號200810047258.1、200910060484.8、200910088122.X、201010257107.6、201110195928.6、201110410305.6、201110134608.X、201110311185.4、201310238845.X、201310204499.3、201410097129.9、201510151118.9、201510933918.6、201610696644.8、201710207906.4、201911177574.5、202010698173.0等。

傳統組培“組培苗是在密閉的試管或玻璃瓶中培養，由于容器內濕度過高、CO₂虧缺，致使培養出的小植株體不能正常地進行光合作用，而不得不依靠培養基中的糖進行異養生長，造成培養時間過長，小植株體生長緩慢，植株長勢瘦弱，移栽成活率低；培養基中的糖還會促進微生物的繁殖，加大植株的污染率；容器內的環境異常，如有害氣體增加，溫度較高，濕度較大，會造成植株葉片少、徒長、玻璃化，難于移栽，或植株發育遲緩，馴化階段植株死亡率高等”[馬明建，宋越冬.基于環境控制的組培苗無糖培養系統.農業工程學報，2009,25（6）:192-197]。開放組培苗也是在密閉容器中培養，所得瓶苗同樣存在上述缺陷。

“常規培養條件下的試管苗氣孔密度比較大, 功能不完善, 在移栽馴化過程中很難適應外界環境, 使光合能力降低, 而且容易出現過度失水等問題, 直接影響試管苗的移栽成活率。……移栽初期試管苗的氣孔開度最大, 蒸騰速率達到峰值, 試管苗處于失水最快的狀態。”（孫冬青等.組培微環境對葡萄風信子組培苗生長及移栽后生理特性的影響.西北農業學報，2008, 17(4) : 244-248, 262）。

開放組培中，培養基微生物污染來自培養基自身所夾雜的微生物和瓶內空間微生物沉降到培養基，開放組培的抗菌劑溶解在瓊脂培養基內，只對培養基部分抗菌，并不針對瓶內空間的微生物，以致培養基所附加抗菌劑必須保持在較高的濃度，難免對所培養植物材料產生毒副作用，這對矛盾是開放式組培的技術難點(關鍵)，限制了開放式組培的廣泛應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種植物開放培養方法及專用培養基，接種外植體后，瓶口敞開培養以改善瓶苗氣體微環境的方法。

本發明的技術方案如下：

一種植物開放培養方法，在配制開放組培培養基時，培養基各組分、瓊脂、抗菌劑和水加熱完全融化后，調酸堿度，分裝到培養瓶，在培養瓶內投入氧氣緩釋顆粒，不加瓶蓋，用干凈薄膜或面板覆蓋瓶口，平放冷卻凝固。按常規開放組培方法接種芽苗外植體，在培養基表面灌注一層非揮發性油性液體，厚0.2-0.5cm，培養瓶不加瓶蓋,敞口平放培養。