[發明專利]新型的甘油單-二酰酯脂肪酶

在審

• 申請號: 202011499617.4
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN113005111A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 趙強;徐正軍;牛其文
• 申請（專利權）人: 豐益（上海）生物技術研發中心有限公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12P7/64;C12N15/81;C12R1/84
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.具有甘油單-二酰酯脂肪酶活性的多肽，其包含選自以下的序列或由選自以下的序列組成：

(a)如SEQ ID NO:1-3和15中任一序列所示的氨基酸序列；以及

(b)由(a)所述的序列經過取代、缺失或添加至少一個氨基酸后得到的序列；

優選地，所述取代為保守性氨基酸取代；和/或

所述缺失或添加為在(a)所述序列的C端或N端缺失或添加1-5個氨基酸，更優選為1-3個氨基酸；

其中由(b)獲得的多肽變體仍保持甘油單-二酰酯脂肪酶活性。

2.如權利要求1所述的多肽，其包含SEQ ID NO:1-3和15中任一序列所示的氨基酸序列；優選地，所述多肽由SEQ ID NO:1-3和15中任一序列所示的氨基酸序列組成；更優選地，所述多肽由SEQ ID NO:2、3或15所示的氨基酸序列組成。

3.編碼權利要求1或2所述的多肽的多核苷酸，其包含選自以下的序列或由選自以下的序列組成：

(a)核苷酸序列，其編碼如權利要求1(a)或1(b)所述的氨基酸序列；以及

(b)在嚴格條件下與3(a)中的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。

4.如權利要求3所述的多核苷酸，其包含SEQ ID NO:4-6和16中任一序列所示的核苷酸序列；優選地，所述多核苷酸由SEQ ID NO:4-6和16中任一序列所示的核苷酸序列組成；更優選地，所述多核苷酸由SEQ ID NO:5、6或16所示的核苷酸序列組成。

5.表達載體，其包含至少一種權利要求3或4所述的多核苷酸。

6.如權利要求5所述的表達載體，其還包含調節所述多核苷酸表達的調控序列，其中所述多核苷酸與所述調控序列可操作地連接；優選地，所述表達載體為質粒。

7.宿主細胞，其包含權利要求3或4所述的多核苷酸、或者權利要求5或6所述的表達載體；優選地，所述宿主細胞為酵母或大腸桿菌。

8.權利要求1或2所述的多肽在催化酯類的合成、水解或轉酯化反應中的用途；優選地，所述酯類為甘油單酰酯和/或甘油二酰酯。

9.合成甘油單酰酯和/或甘油二酰酯的方法，其包括將權利要求1或2所述的多肽與脂肪酸和甘油進行接觸。

10.篩選權利要求1或2所述的多肽的方法，其包括：

1)將SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列進行突變，得到突變序列，優選地，所述突變為定點突變；

2)將步驟1)中得到的突變序列進行表達以獲得相對于SEQ ID NO:8所示的多肽發生突變的多肽，其中優選地，所述表達包括將含所述突變序列的表達載體轉化至酵母菌株中；以及

3)篩選酶活力和/或熱穩定性高于SEQ ID NO:8所示的多肽的突變多肽；

其中優選地，所述突變多肽包含選自以下突變位點中的任一種或它們的組合：Y22C、D25R、T27R、Y84H/R、W116A/H/F、N136D、M209A/V、S229R、T230R、S231R、I260E/R/H和G269C。