[發明專利]一種同時測定黃芪中黃酮類化合物含量的測定方法

在審

• 申請號: 202011497353.9
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112505192A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 李震宇;李蓉蓉;秦雪梅
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/74
• 代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115
• 代理人: 郭海燕

本發明公開了一種同時測定黃芪中黃酮類化合物含量的測定方法，屬于中藥有效成分質量控制技術領域。通過取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、紫檀烷苷、異黃烷苷、異黃烷適量，加甲醇，制成對照品貯備液，分別吸取上述對照品貯備液適量，制成混合對照品溶液；取黃芪粉末過篩并移取甲醇，加熱回流處理，放冷至室溫，稱重，用甲醇補足減失的重量，收集續濾液；精密移取續濾液，水浴蒸干，轉移至容量瓶定容至刻度線，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各，注入高效液相色譜儀，進行測定；采用外標一點法計算供試品黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、紫檀烷苷、異黃烷苷、異黃烷的含量。

技術領域

本發明涉及中藥有效成分質量控制技術領域，具體涉及一種同時測定黃芪中黃酮類化合物含量的測定方法。

背景技術

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，具補氣升陽，固表止汗之功效，用于氣虛乏力，食少便溏，中氣下陷，久瀉脫肛等。黃芪化學成分包括黃酮類、皂苷類、多糖、氨基酸等。其中黃酮類化合物是黃芪中主要的有效成分，具有抗病毒、降血脂、抗菌及抗氧自由基等功效。

目前，在2020版《中國藥典》中毛蕊異黃酮葡萄糖苷為黃芪黃酮類化合物含量測定的指標。藥理研究表明，毛蕊異黃酮葡萄糖苷具有抗病毒、抗氧化和降血糖的作用(于玲等.中醫藥信息，2018,35(02):104-108.)。而黃芪中其他黃酮類化合物也具有一定的藥理活性，如芒柄花苷具有神經保護作用、血管內皮細胞保護作用、抗氧化活性(于玲等.中醫藥信息，2018,35(02):104-108.)，紫檀烷苷具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化活性(孫維洋等.亞太傳統醫藥,2008(05):46-47.)，異黃烷苷具有血管內皮細胞保護作用等(陳建真等.醫藥導報,2009,28(10):1314-1316.)。因此，按照現行藥典采用單一黃酮類成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷評價黃芪藥材的質量不夠全面，應將其他黃酮類活性成分也納入評價指標。

已有文獻中報道了黃芪中多個指標的同時測定，如同時測定黃芪中4種黃酮類化合物的含量，其檢測時間為65min，流動相A為乙腈和流動相B為0.3％甲酸水，洗脫梯度為：0-10min，18％-20％A；10-35min，20％-24％A，35-42min，24％-27％A，52-60min，27％-34％A，60-65min，34-40％，65-70min，40-50％A檢測波長為254nm(廣州化工，2020，48(17):74-76)。同時測定黃芪中5種黃酮類化合物的含量，其檢測時間為85min，流動相A為乙腈，流動相B為0.05％磷酸水，洗脫梯度為：0-15min，5％-15％A；15-40min，15％-38％A，40-53min，38％-47％A，53-60min，47％-68％A，60-70min，68-80％，70-85min，80-90％A，檢測波長206，246nm(藥物研究評價，2019，42(5):900-906)。

可見，現有測定方法的檢測時間較長(多為50分鐘以上)，液相梯度變化復雜導致方法的重現性差。此外，黃芪中各類黃酮類成分的最大吸收波長不一致，而已有方法多采用單一吸收波長進行測定。

發明內容

針對上述問題本發明提供了一種同時測定黃芪中黃酮類化合物含量的測定方法。

為了達到上述目的，本發明采用了下列技術方案：

一種同時測定黃芪中黃酮類化合物含量的測定方法，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備：取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、紫檀烷苷、異黃烷苷、異黃烷適量，精密稱定，分別放置于容量瓶中，加甲醇，制成1mg/mL的對照品貯備液，分別吸取上述對照品貯備液適量，制成混合對照品溶液，5種黃酮的濃度依次為100、20、60、30、50μg/mL。