[發明專利]一種非變性人H鐵蛋白裝載藥物的方法

在審

• 申請號: 202011496039.9
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112409446A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 孫國明;尹雨芳;陳向茹
• 申請（專利權）人: 南京納么美科技有限公司
• 主分類號: C07K5/113
• 分類號: C07K5/113;A61K47/69;A61K45/00;A61K31/704;A61K33/243;A61K31/555;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 王佳妹

本發明屬于鐵蛋白封裝藥物技術領域，具體公開了一種非變性人H鐵蛋白裝載藥物的方法。本發明通過HFn?小分子藥物晶體結構分析，鑒定發現HFn的蛋白殼上存在12條藥物通道，決定該通道的關鍵氨基酸是Asp89?Cys90?Asp91?Asp92，同時，該小分子藥物通道的氨基酸具有溫度因子調控的性質。基于上述發現，本發明在保證鐵蛋白結構不變，非變性條件下，通過探索不同孵育溫度和/或不同的孵育條件，在保持鐵蛋白結構完整前提下，實現了對HFn包載藥物最優條件的確定。利用本發明所獲得的非變性條件下的包載條件，可以方便、快捷、高效、足量的利用HFn包載不同的小分子藥物。

相關申請的交叉引用

本申請要求于2020年07月16日提交的中國專利申請CN2020106856800的優先權，并且通過引用將其全部并入。

技術領域

本發明屬于鐵蛋白封裝藥物技術領域，具體涉及一種非變性人H鐵蛋白裝載藥物的方法。

背景技術

鐵蛋白(ferritin)是一種鐵儲存蛋白，在細胞的鐵穩態和抗氧化中起重要作用。由于其獨特的24個亞基自組裝形成的、可通過基因和化學修飾來實現附加功能的蛋白質外殼和能夠封裝藥物的中空腔的結構，鐵蛋白已經成為一種很有轉化前景的藥物遞送載體¹。最近的研究表明，人重鏈鐵蛋白(Heavy-chain ferritin，HFn)的受體是轉鐵蛋白受體1(Transferrin receptor1，TfR1)，即無需任何靶向修飾，鐵蛋白可通過與受體TfR1相互作用主動靶向包括肺癌和乳腺癌在內的不同類型的腫瘤細胞(ZL201110122433.0，PCT/CN2012/075291)，表明了鐵蛋白在腫瘤靶向應用中的潛在用途^2-6。可見，鐵蛋白作為化療藥物載體在腫瘤治療領域具有巨大的潛力^7,8。

目前已有眾多化療藥物被成功裝載入鐵蛋白內部并用于腫瘤治療中。然而，其載藥效率仍相對較低。目前，鐵蛋白的載藥方法主要分為三種，包括直接將藥物化學偶聯到鐵蛋白表面，pH介導鐵蛋白的解聚/復聚法和脲介導的鐵蛋白解聚/復聚法(ZL201410230829.0，PCT/CN2014/140159)。化學偶聯法制備的藥物暴露在鐵蛋白表面，可能會造成對鐵蛋白理化性質的影響，同時容易因linker的斷裂造成潛在毒性。鐵蛋白解聚/復聚法將藥物封裝到蛋白殼內部，可以避免以上問題。pH介導的鐵蛋白解聚/復聚裝載體系中，因為劇烈的pH變化會損傷蛋白的結構，因此造成藥物裝載后，鐵蛋白-藥物復合體不穩定，難以實現產業化轉化⁹；脲介導的鐵蛋白解聚/復聚體系，孵育時間長，蛋白梯度透析損失大，最重要的是藥物裝載效率有限，不能滿足臨床需求。因此，本領域亟需開發溫和、穩定、便捷的新型H Fn載藥方法。

參考文獻：

1.He,J.；Fan,K.；Yan,X.,Ferritin drug carrier(FDC)for tumor targetingtherapy.Journal of Controlled Release 2019.

2.Fan,K.；Cao,C.；Pan,Y.；Lu,D.；Yang,D.；Feng,J.；Song,L.；Liang,M.；Yan,X.,Magnetoferritin nanoparticles for targeting and visualizing tumourtissues.Nat Nanotechnol 2012,7(7),459-64.

3.Liang,M.；Fan,K.；Zhou,M.；Duan,D.；Zheng,J.；Yang,D.；Feng,J.；Yan,X.,H-ferritin-nanocaged doxorubicin nanoparticles specifically target and killtumors with a single-dose injection.Proc Natl Acad Sci U S A 2014,111(41),14900-5.