[發明專利]一種評價CAR-T細胞有效性的方法

在審

• 申請號: 202011495901.4
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112553289A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 黃衛人;余磊;陳巍;李志超
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院（深圳市轉化醫學研究院）
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/09;C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 深圳市創富知識產權代理有限公司 44367
• 代理人: 肖琪

本發明提供一種評估CAR?T細胞有效性的方法，所述方法通過采用腫瘤類器官與CAR?T細胞共培養，檢測相關細胞因子和顯微鏡觀測腫瘤類器官與CAR?T細胞的相互作用及殺傷后的細胞形態變化評估CAR?T細胞的有效性，可更為直觀、準確和全面地評估CAR?T細胞對腫瘤類器官是否有殺滅作用，所述方法具有較高的準確性、重現性和操作簡便性。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體涉及一種評價CAR-T細胞有效性的方法和一種CAR-T細胞的制備方法。

背景技術

隨著城市化和老齡化進程的加快，惡性腫瘤已成為世界第二大死亡原因。盡管手術和放化療仍是臨床上治療和緩解惡性腫瘤疾病進展的常規手段。然而個體差異以及藥物耐受是臨床上治療失敗的重要根源。腫瘤個體化免疫治療是近年來全世界醫學研究的熱點，特別是以嵌合抗原受體(CAR)-T細胞領域，已經在多種腫瘤的免疫治療方面取得重大突破。依據不同病人的表面抗原表達譜，設計并構建特異性靶向該抗原的CAR分子結構，裝配到患者個體化的T細胞上，并以抗原獨立的方式識別并殺傷腫瘤細胞。因此，CAR-T細胞免疫治療是非常具有潛力的個人免疫治療選擇。

實際上，任何希望獲得臨床成功的個人免疫療法都必須通過大量嚴格的臨床前實驗進行評估和驗證。傳統的單層細胞系和動物模型(患者來源的異種移植物，PDX)目前是臨床前評估的兩個常見選擇。細胞系單層細胞可以在簡單的體外培養條件下輕松擴增，但由于缺乏腫瘤特性而受到限制，而這正是個體化治療評估的關鍵因素。PDX能較好的還原其原位腫瘤生物學特征，但費事費力，且接種成功率仍是關鍵的制約因素。

因此，仍亟需開發一種更準確、全面、直觀和簡便的評估CAR-T細胞有效性的方法。

發明內容

發明概述

本發明的第一目的是提供一種評估CAR-T細胞有效性的方法，解決現有技術中因缺乏腫瘤特性而不準確，及操作復雜，接種成功率低等問題；所述方法通過采用腫瘤類器官與CAR-T細胞共培養，檢測相關細胞因子和顯微鏡觀測腫瘤類器官與CAR-T細胞的相互作用及殺傷后的細胞形態變化，可更為直觀和全面地確認CAR-T細胞對腫瘤類器官是否有殺滅作用，由于腫瘤類器官具有與患者腫瘤組織相近的腫瘤特性，以及不需要進行動物模型的構建，因此，所述方法更準確、全面、直觀和簡便。

進一步的，本發明公開了所述腫瘤類器官的制備方法，所述方法不同的培養時間采用不同的培養基進行培養，所得腫瘤類器官與腫瘤組織的病理形態學特征非常相似，可精確還原其來源腫瘤組織的病理形態學特征，進而提高評估CAR-T細胞有效性方法的準確性。

本發明的第二目的是提供一種CAR-T細胞的制備方法，所述方法操作簡單，成功率高。

發明詳述

第一方面，本發明提供一種評估CAR-T細胞有效性的方法。

一種評估CAR-T細胞有效性的方法，包括以下步驟：

(a)將腫瘤類器官經消化、細胞染色a，與細胞染色b后的CAR-T細胞分別重懸后共培養，得到共培養體系；

(b)取步驟(a)中共培養體系的上清液測定細胞因子；

(c)用接合熒光染料的顆粒酶B抗體對共培養體系進行染色，顯微觀測CAR-T細胞對腫瘤類器官的殺傷情況。

所述腫瘤可以包括膀胱癌、腎癌或上尿路尿路上皮癌等腫瘤。

所述CAR-T細胞含有能與所述腫瘤或腫瘤類器官的細胞表面特異性靶點發生特異性結合的抗體。

在一些實施例中，所述腫瘤為膀胱癌，所述特異性靶點為MUC1。

在一些實施例中，所述腫瘤為腎癌，所述特異性靶點為GD2。