[發明專利]一種用于檢測毛油中磷脂的三維光敏電極的制備及檢測方法

在審

• 申請號: 202011494723.3
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112505115A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 于殿宇;王彤;陳妍;王寧;李子越;張星震;王立琦;江連洲;宋旸
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N27/36;B82Y15/00;B82Y40/00
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1.一種用于檢測毛油中磷脂的三維光敏電極的制備及檢測方法，其特征在于制備三維光敏電極的制備以及毛油中磷脂的檢測方法通過以下步驟實現：

步驟一：將ITO導電玻璃切成5.0×1.0cm的長條，依次用乙醇，丙酮，水分別超聲清洗5min，干燥；然后在一端留出1.0cm的一段作為電極端子，在另一段用絕緣漆封住并在表面留出直徑為6.0mm的空白作為ITO電極；采用水熱法合成三維SnO₂納米陣列；前驅液(30～40ml)由0.03mol L^-1SnCl₄·5H₂O和0.3mol L^-1NaOH組成，加入5～10ml(0.12mol·L^-1)NaCl和0.6～0.8g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；先將前驅體溶液攪拌1h，然后在密封的聚四氟乙烯襯里高壓釜中將ITO玻璃襯底浸泡在前驅體溶液中，在200℃下進行12h的水熱生長；反應結束后，將高壓釜自然冷卻至室溫；然后沉積的襯底用去離子水反復漂洗，然后在空氣中烘干；

步驟二：稱取3.9mg的硫堇溶于3mL的pH為1.9的醋酸溶液(4.4mol·L^-1)中，配制得到的硫堇濃度為4mmol·L^-1；將具體實施方式一中處理后的ITO電極放入含有4mmol·L^-1的硫堇電解池中電沉積，在1.2V電位下沉積2400s后，用水清洗掉表面吸附的Th單體后，再用pH5.5的PBS清洗；所得電極即為制備好聚硫堇光敏電極；

步驟三：準確稱取10.0mg殼聚糖溶于1％醋酸溶液中，室溫下攪拌一個小時直至完全溶解，得透明的殼聚糖膠體，濃度為10.0mg·mL^-1；5％的戊二醛稀釋至0.25％，儲存備用；用微量注射器移取5～10μL殼聚糖溶液滴涂在聚硫堇光敏電極表面，并于室溫下自然晾干成膜，PBS清洗，晾干；取5～10μL、0.25％戊二醛滴于電極表面反應30min，PBS清洗后，再滴加5～10μL濃度為0～1.7g·L^-1膽堿氧化酶，室溫反應1h，干燥得制備好的三維光敏電極；

步驟四：采用自制的光電化學系統進行光電檢測；所有光電化學實驗均在chi660b電化學工作站進行；PEC檢測采用經典的三電極系統；以三維光敏電極為工作電極，Ag/AgCl電極為參比電極，鉑絲電極為對電極；所有電化學測試均在室溫光電化學反應池中進行；以20～40mL 10mmol/L的pH5.5～7.5磷酸緩沖液作為電解液，50W碘鎢燈作為照射源，光照強度在6mW·cm^-2～15mW·cm^-2，在光電界面施加0.10V～0.50V偏置電壓；向電解池中注入PC在5～25mg/L濃度范圍可獲得線性響應(樣品并同時啟動電流檢測，待催化反應8min時，開啟光閘，每20s切換1次，形成光電流-時間圖譜；

步驟五：將PC(40～60mg)加入裝有90～110mL一級大豆油的容器中，充分攪拌，制備大豆毛油；然后樣品稀釋成不同濃度的PBS緩沖液；制備了一定PC含量的大豆毛油樣品，加入90～110μL、3mg/mL磷脂酶D溶液后，加入1％Triton-X100作為乳化劑，在37℃下攪拌30min，在最佳條件下，將三維光敏電極加入10～30mL大豆毛油中測定其光電流，得到樣品的PC含量。

2.根據權利要求1所述的一種用于檢測毛油中磷脂的三維光敏電極的制備及檢測方法，其特征在于步驟三中膽堿氧化酶濃度為0～1.7g·L^-1。

3.根據權利要求1所述的一種用于檢測毛油中磷脂的三維光敏電極的制備及檢測方法，其特征在于步驟四中施加的偏置電壓為0.10V～0.50V。

4.根據權利要求1所述的一種用于檢測毛油中磷脂的三維光敏電極的制備及檢測方法，其特征在于步驟四中光照強度為6mW·cm^-2～15mW·cm^-2。

5.根據權利要求1所述的一種用于檢測毛油中磷脂的三維光敏電極的制備及檢測方法，其特征在于步驟四中包含PC緩沖溶液的pH為5.5～7.5。