[發明專利]一種具有抑制腫瘤細胞增殖功能的多肽及應用

有效

• 申請號: 202011494425.4
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112500470B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 賈靜;楊新燕;晏沙沙;王屹喆
• 申請（專利權）人: 杭州醫學院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;A61K48/00;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

本發明公開了一種具有抑制腫瘤細胞增殖功能的多肽及應用。所述多肽為Ku70蛋白截短體，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本發明利用突變PCR的方法，從Ku70蛋白內分離出可以有效抑制腫瘤增殖的多肽Ku70?C。體外抗腫瘤活性檢測表明，改造后的蛋白表現出良好的抗腫瘤增殖特性，可用于優化抗腫瘤多肽，為開發抗腫瘤藥物提供模型。本發明多肽Ku70?C只有74個氨基酸殘基，分子量較小，免疫原性低、組織滲透性好。在醫藥領域具有一定的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，特別是涉及一種具有抑制腫瘤細胞增殖功能的多肽及應用。

背景技術

傳統的腫瘤治療方法，多采用手術、射線或化學藥物治療手段，副作用大且容易復發，即使是新興的腫瘤免疫療法，仍然無法克服腫瘤治療藥物副作用大、易復發等缺點。尋找安全、有效的腫瘤靶向治療藥物是目前腫瘤治療領域亟待解決的問題。

多肽藥物免疫原性低，易于合成改造，組織滲透性好，已經表現出在腫瘤、心血管、免疫疾病等疾病治療方面有很好的應用前景。目前全球有80余種多肽藥物上市，近200種正在開展臨床前試驗。

多肽藥物一般由幾個到幾十個天然或非天然氨基酸組成，能夠通過天然產物提取、基因重組和化學合成等方式獲得。除了直接用于治療疾病，多肽藥物還具有其他廣泛的應用領域，比如作為藥物載體輸送藥物，分子探針檢測疾病，或作為小分子藥物的模型，為開發靶向小分子藥物提供結構基礎。

Ku70蛋白由XRCC6（X-ray repair complementing defective repair inChinese hamster cells 6）基因轉錄翻譯而成，其與腫瘤的發生發展、浸潤、轉移關系密切。研究顯示，Ku70在交界性和惡性卵巢漿液性組織中的表達明顯高于正常卵巢組織和卵巢囊腺瘤，在直腸癌組織中的表達明顯高于直腸粘膜，在宮頸癌、胰腺癌等組織中Ku70的表達明顯高于正常組織，且其表達情況還與肺癌、前列腺癌等腫瘤預后相關。腫瘤分子遺傳學的研究，更是提供大量Ku70與胃癌、肝癌、兒童白血病等腫瘤易感性相關的證據，表明Ku70可能參與腫瘤發生過程。

Ku70蛋白被研究得最為廣泛的生物學功能，是其與Ku80蛋白構成異構二聚體，參與DNA雙鏈斷裂的修復。除了NHEJ依賴型生物學功能外，Ku70還被發現有NHEJ非依賴型生物學功能：Ku70可誘導腫瘤發生上皮細胞-間充質轉化（EMT）或促腫瘤細胞增殖，參與腫瘤的發生發展；Ku70還可與Bax蛋白結合，阻止Bax誘導細胞凋亡。

公開號為CN111333712A的發明公開了一種具有抑制腫瘤細胞增殖功能的Ku70蛋白突變體、基因及應用。所述Ku70蛋白突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明利用Ku70蛋白對腫瘤細胞增殖的影響，通過人工改造，構造了可以有效抑制腫瘤增殖的變異型Ku70蛋白Mu4。體外抗腫瘤活性檢測和動物實驗都表明，改造后的蛋白表現出良好的抗腫瘤增殖特性，可用于研究Ku70參與腫瘤細胞增殖的作用機理，為開發抗腫瘤藥物提供理論基礎和模型。變異型Ku70蛋白Mu4對肺癌或宮頸癌細胞系的增殖抑制效果明顯，而對肝癌、結腸癌細胞系及非癌細胞系沒有明顯的抑制效果。然而，該申請中Mu4共572個氨基酸，整體分子量較大，有待進一步改進。

發明內容

本發明針對現有技術中存在的技術問題，從Ku70蛋白內分離出一段多肽，構建表達該多肽的表達質粒，可通過脂質體轉染細胞的方式，在腫瘤細胞內過表達多肽，并抑制腫瘤細胞增殖，表明此多肽具有潛在的開發藥物價值。

一種具有抑制腫瘤細胞增殖功能的多肽，為Ku70蛋白截短體，氨基酸序列如SEQID No.1所示。該多肽為Ku70蛋白的C端截短體，共包括C端的74個氨基酸。

本發明又提供了所述多肽在制備抗腫瘤藥物中的應用。優選的，其中腫瘤為肺癌或宮頸癌。

本發明又提供了編碼所述多肽的基因。優選的，所述的基因，核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示。