[發明專利]一種檢測分子的方法和裝置

有效

• 申請號: 202011494318.1
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112229774B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 紀偉;谷陸生;徐濤
• 申請（專利權）人: 生物島實驗室;中國科學院生物物理研究所
• 主分類號: G01N15/06
• 分類號: G01N15/06
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 李渤

1.一種檢測信號分子的方法，其包括以下步驟：

（1）提供包含微粒的溶液，其中所述微粒包括結合有待檢測信號分子的微粒；

（2）將所述溶液中的微粒固定到固相載體的表面和/或內部，所述固相載體不需要進行空間劃分，實現微粒隨機分布；

（3）通過明場對選定視野內的微粒進行計數；

（4）通過暗場對選定視野內的結合有信號分子的微粒進行計數；

（5）根據步驟（3）和（4）所得計數結果確定信號分子的濃度；

其中，步驟（3）包括在明場下去除聚團/互相重疊的微粒。

2.一種檢測一種或多種目標分子的方法，其包括以下步驟：

（1）提供包含微粒的溶液，目標分子通過特異性結合反應形成復合物，所述微粒連接所述復合物，所述復合物標記有信號分子；

（2）將所述溶液中的微粒固定到固相載體的表面和/或內部，所述固相載體不需要進行空間劃分，實現微粒隨機分布；

（3）通過明場對選定視野內的微粒進行計數；

（4）通過暗場對選定視野內的結合有復合物的微粒進行計數；

（5）根據步驟（3）和（4）所得計數結果確定信號分子的濃度，進一步確定目標分子的濃度；

其中，步驟（3）包括在明場下去除聚團/互相重疊的微粒。

3.根據權利要求1或2中任一項所述的方法，其中，所述固定到固相載體的表面和/或內部的微粒的數量是不確定的。

4.根據權利要求2所述的方法，其中，所述目標分子選自蛋白質、多肽、氨基酸、抗原、受體、配體和核酸中的一種或多種。

5.根據權利要求2所述的方法，其中，所述目標分子為抗體。

6.根據權利要求2所述的方法，其中，所述特異性結合反應選自免疫反應、雜交反應、受體-配體相互作用中的一種或多種。

7.根據權利要求1或2中任一項所述的方法，其中，所述微粒為磁性微粒。

8.根據權利要求7所述的方法，所述磁性微粒為磁珠。

9.根據權利要求8所述的方法，所述磁珠的粒徑為600nm-10μm。

10.根據權利要求9所述的方法，所述磁珠的粒徑為1μm-5μm。

11.根據權利要求1或2中所述的方法，其中，所述信號分子選自發色團、地高辛標記探針、金屬納米顆粒和酶中的一種或多種。

12.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述信號分子選自有機小分子熒光探針、量子點、熒光小球、三維DNA納米結構報告探針、上轉換發光納米材料小球、滾環擴增熒光分子放大結構和核酸適配體熒光分子放大結構中的一種或多種。

13.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述信號分子為量子點小球。

14.根據權利要求13所述的方法，其中，所述量子點小球的尺寸為110nm以內。

15.根據權利要求1或2中任一項所述的方法，其中，在所述步驟（2）中，通過外加磁場和/或電場和/或凝膠將所述微粒固定于固體載體的表面和/或內部。

16.根據權利要求1或2任一項所述的方法，其中，所述固相載體選自多孔板、平板或流道。

17.根據權利要求1或2任一項所述的方法，其中，通過明場顯微成像確定微粒在圖像里的坐標。

18.根據權利要求17所述的方法，其中，根據所述微粒的亮度差異確定所述微粒的坐標。