[發明專利]一種新冠IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法

在審

• 申請號: 202011491661.0
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN114646759A
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 楊治慶;蔡俊宏;宗成利
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及涉生物分析及醫療領域，公開了一種新冠IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法。以一定比例混合重組新冠病毒N蛋白和雞IgY作為抗原標記的納米金制備結合墊，以抗體包被液稀釋的鼠抗人IgM和和鼠抗人IgG，兔抗雞IgY作為分別作為T線和C線。通過依次組裝樣品墊、結合墊、NC膜和吸水紙制備成試紙條。本發明提供的方法制備方法，可以為制備新冠病毒抗體膠體金檢測試紙條提供，樣品墊的處理方法、結合墊的預處理及制備方法；抗體包被硝酸纖維膜的制備方法，對生物分析及醫療領域具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種新冠IgG/IgM抗體檢測試紙條的制備方法，設計可用于生物分析及醫療領域。

背景技術

由于核酸檢測試劑盒對檢測環境、檢測人員的高要求，以及核酸檢測專門實驗室的普及程度，極大的限制了核酸檢測試劑盒的基層以及家庭大范圍篩查、推廣和應用。目前，除了核酸檢測方法，通過檢測病毒本身的蛋白（抗原）或者病毒感染后體內產生的抗體來實現快速篩查也是可行的。本發明針對2019-nCoV N蛋白特異性抗體，結合膠體金免疫層析技術，開發出可捕獲新型冠狀病毒感染人群血清特異抗體（IgM-急性感染/IgG-既往感染）的膠體金層析檢測檢測試紙條，打破需要專業的儀器和特殊檢測環境的缺點。

發明內容

本發明的目的是針對針對2019-nCoV N蛋白特異性抗體，提供一種檢測特異性抗體的膠體金免疫層析試紙條制備方法；

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

所述樣品墊處理方法為，浸入處理緩沖液：5-20 mM PB 0.1-2%蔗糖+-0.01-0.5%吐溫-20+0.001-0.5mg/mL 抗RBC抗體 pH=6.5-9.5。浸入1-3 min后取出，在25-45 ^oC下干燥3-48小時；

所述金標墊處理方法為，浸入處理緩沖液：5-20 mM PB 0.1-5%蔗糖+-0.01-0.5%吐溫-20+0.001-3% BSA pH=6.5-9.5。浸入1-3分鐘后，在25-45 ^oC下干燥3-48小時；

所述硝酸纖維素膜需包被相應抗體，T1抗體為鼠抗人IgM，T2鼠抗人IgG,質控線為兔抗雞IgY。以1 μL/cm速率劃線后，在 25-45 oC下干燥3-48小時；

所述抗原修飾的抗體金為N蛋白標記納米金和雞IgY標記納米金混合液，混合比例為1:1-8:1。

具體實施方式：

以下通過具體的實施例對本發明作進一步說明，有助于本領域的普通技術人員更全面的理解本發明，但不以任何方式限制本發明；

實施例1：

N蛋白標記納米金的制備：

1)取1 ml 30nm膠體金溶液于潔凈容器中，加入適量體積0.5M K2CO3溶液，邊加入邊混勻，全部加入后混勻1min；以pH試紙鑒定pH值，膠體金溶液pH值10左右；

2)取 N蛋白溶液加入到上述膠體金溶液中，邊加入邊混勻，使得最終N蛋白濃度為5 μg/mL；加入完畢后混勻反應30min；

3)取BSA封閉液，邊震蕩邊加入至上述膠體金溶液中，使得BSA濃度為1%，震蕩反應30min；

4)將上述膠體金溶液進行離心棄上清，轉速8000-9000g/min，離心10min，以pH=10的PB溶液洗滌3次。（注意洗滌液pH值不可過低，負責納米金會團聚，無法重懸）；

5)取0.1 ml 膠體金重懸液（10mM PB+3%蔗糖+ 1%BSA+0.1%的吐溫20，pH=8.5），充分溶解上述膠體金沉淀；

實施例2：

樣本墊制備：在潔凈間中用量筒量取樣品墊處理液（20mM PB+2%蔗糖+0.1%吐溫-20+0.03mg/mL 抗RBC抗體 pH=8.5），40 mL準備樣品墊1張（規格21cm×30cm）；