[發明專利]一種雙抗原標記納米金的方法

在審

• 申請號: 202011491659.3
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN114646758A
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 楊治慶;蔡俊宏;宗成利
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N33/543;G01N33/553
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及涉分析檢測領域，公開了雙抗原標記納米金的方法，通過一次調節pH值可在同一納米金表面標記新冠病毒N蛋白和雞IgY。本發明提供的雙抗原標記納米金的制備方法，可以一步制備檢測線和質控線所需的金標，不需要制備兩種金標后再混合。使用時，只需將所制備金標噴到結合墊表面，烘干后便可直接使用，省時省力，提高了實驗人員的工作效率；本發明提供了一種雙抗原標記納米金的方法，對分析測試領域具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種雙抗原標記納米金的方法，可用于膠體金免疫層析試紙條制備等領域。

背景技術

血清抗體檢測方式主要有免疫膠體金層析法。其原理是將特異的抗原/抗體先固定于酸類纖維素膜或NC膜等的某一區帶，當該干燥的酸類纖維素一端浸入樣品后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗原的區域時，樣品中相應的抗體即與該抗原發生特異性結合。同時利用金粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結合處。當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色的斑點；

在試紙條制備中，抗原標記納米金是很重要的一環，目前采取的構建新冠病毒N蛋白抗體試紙條時，金標制備主要由兩種抗原分別修飾納米金（即N蛋白標記，和質控線抗原標記如雞IgY），最后按照一定比例混合而成。這種方法雖然簡單，有效，但分開標記也會使得操作步驟繁瑣。本發明提供一種雙抗原標記納米金的方法，通過依次標記，可實現一次離心洗滌即可獲得所需金標。

附圖說明：

圖1：雙抗原標記金標在相應抗體顯色。

發明內容

本發明的目的是針對N蛋白與雞IgY抗體分開標記納米金的繁瑣步驟，提供一種簡單的雙抗原標記金的制備方法；

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

所述雙抗原標記方法為：雞IgY修飾抗原納米金，取1 mL納米金，用0.2-0.5 M碳酸鉀調節PH值為8.0-9.5，加入雞IgY使得最終濃度為1-20 μg/mL，反應30-120分鐘；

所述雙抗原標記方法為：標記雞IgY后，利用0.2-0.5 碳酸鉀調節PH值為9.5-10.5，加入新冠病毒N蛋白至最終濃度為0.1-20μg/mL，反應30-120分鐘；

所述雙抗原標記方法為：標記雞IgY和新冠N蛋白后加入BSA封閉液,使得最終BSA濃度為0.5%-3%，封閉30-120分鐘。隨后8000-10000rpm離心，棄上清，以pH=9.5的緩沖液洗滌，最后分散于20mM PB+3%蔗糖+0.1%吐溫-20+1% BSA pH=8.5的緩沖液中。

具體實施方式

以下通過具體的實施例對本發明作進一步說明，有助于本領域的普通技術人員更全面的理解本發明，但不以任何方式限制本發明；

實施例1：

雙抗原標記納米金制備：取1 mL納米金，用0.5 M碳酸鉀調節PH值為8.0，加入雞IgY使得最終濃度為10 μg/mL，反應60分鐘。隨后繼續以0.5 碳酸鉀調節PH值為10.0，加入新冠病毒N蛋白至最終濃度為0.1-20μg/mL，反應60分鐘。最后加入BSA使得最終BSA濃度為1%，封閉30-120分鐘。隨后8000-10000rpm離心，棄上清，以pH=9.5的緩沖液洗滌，最后分散于20mM PB+3%蔗糖+0.1%吐溫-20+1% BSA pH=8.5的緩沖液中；

實施例2：

蛋白標記驗證：以10 mM PB pH=7.5，3%的海藻糖作為抗體包被液，以1 mg/mLhis-Tag抗體在和1 mg/mL的兔抗雞IgY分別在NC膜劃線，37^oC下干燥。隨后將所標記的雙抗原標記納米金以3 uL/cm的速率噴加到預處理的結合墊上，37^oC干燥12小時。依次將玻纖樣品墊，結合墊，NC膜和吸水紙黏貼至PVC底板上。滴加樣品稀釋液（10 mM PB 3% NaCl， 1%BSA和0.1% PVP），觀察his-Tag抗體劃線和兔抗雞IgY劃線的NC膜變化。可觀察到his-Tag抗體和兔抗IgY劃線部位顯示出紅色（圖1），表明蛋白標記成功。