[發明專利]一種熒光NP-Au靶向造影劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011489623.1
• 申請日: 2020-12-16
• 公開（公告）號: CN112494665A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 黃瑛;王博;莊連婷;史婧文;朱天彤
• 申請（專利權）人: 中國醫科大學附屬盛京醫院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 馬維駿

本發明屬生物醫用材料和造影劑制備的技術領域，涉及一種熒光NP?Au靶向造影劑及其制備方法和應用。一種熒光NP?Au靶向造影劑，該靶向造影劑以TAMs標志物CD163/MMR/Arg?1為靶點，所述熒光NP?Au靶向造影劑在制備腫瘤靶向造影劑中的應用。本發明采用多孔納米新材料熒光NP?Au，利用分子生物學等技術深入研究熒光NP?Au靶向造影劑在組織細胞中的成像能力，該造影劑能夠對腫瘤中的TAMs進行靶向顯影。

技術領域

本發明屬生物醫用材料和造影劑制備的技術領域，涉及一種熒光NP-Au靶向造影劑及其制備方法和應用。

背景技術

在腫瘤發生機制的研究中，其發生發展不但是由于腫瘤細胞自身的惡變，同時與腫瘤微環境關系密切。腫瘤相關巨噬細胞(tumor-associated macrophages，TAMs)是腫瘤微環境中最豐富的免疫細胞，是免疫抑制細胞中重要的一員。TAMs通過創造促變異的炎性環境，分泌免疫抑制因子、細胞因子和生長因子，抑制T細胞的增殖和活化，調節并促進Th2型免疫應答，促進腫瘤細胞侵襲、參與腫瘤血管新生和促進腫瘤的浸潤和轉移。研究表明，TAMs存在于腫瘤發展的所有階段，其數量與腫瘤的惡性程度和不良預后相關，在腫瘤的侵襲和轉移過程中起到了促進作用，而靶向抑制TAMs可減少腫瘤生長、增殖和轉移。在結腸癌小鼠模型中，使用CSF-1R抗體靶向調控TAMs極化導致小鼠腫瘤體積顯著減少和長期生存，表明TAMs可以作為腫瘤治療研究中強有力的靶標。

發明內容

鑒于現有技術存在的問題，本發明目的在于提供一種熒光NP-Au靶向造影劑及其制備方法和應用，本發明采用多孔納米新材料熒光NP-Au，利用分子生物學等技術深入研究熒光NP-Au靶向造影劑在組織細胞中的成像能力，該造影劑能夠對腫瘤中的TAMs進行靶向顯影。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案。

一種熒光NP-Au靶向造影劑，該靶向造影劑以TAMs標志物CD163/MMR/Arg-1為靶點。

進一步地，所述熒光NP-Au靶向造影劑的制備方法，具體包括以下步驟。

步驟1、將1M HEPES用dd水稀釋為20mmol緩沖液，分別取5μl、6μl、7μl、8μl、9μlCD163抗體溶于20mmolHEPES緩沖液中，得到50μl混合液。

步驟2、將不同濃度的CD163抗體溶液分別與1ml金納米棒溶液作用，30分鐘后測量各溶液的吸光度；當金納米棒溶液最大吸收峰值不變時，進入吸收峰平臺的初始濃度即為所需最佳CD163抗體濃度。

步驟3、取該濃度混合物溶液1ml加入50μl聚乙二醇作用10分鐘后，在4℃下以15000rmb的轉速離心15分鐘，得到mAb-CD163/Au共軛物；然后棄去上清液，加入PBS緩沖液，得到分散良好穩定的溶液，4℃下保存。

進一步地，所述熒光NP-Au靶向造影劑在制備腫瘤靶向造影劑中的應用。

與現有技術相比，本發明的有益效果如下。

本發明提供的熒光NP-Au靶向造影劑，采用熒光NP-Au利用分子生物學等技術，深入研究靶向性NP-Au在組織細胞中的成像能力。向微環境中非腫瘤細胞的優勢是熒光NP-Au靶向造影劑的基因更穩定，更不容易形成耐藥。從腫瘤微環境相關的巨噬細胞著手，研究TAMs在腫瘤中的靶向顯像。實驗證明mAb-CD163/Au在M2型巨噬細胞內的聚集明顯多于M1型巨噬細胞，說明M2型巨噬細胞表面高表達CD163分子，因此可以吞噬更多的mAb-CD163/Au；隨著納米顆粒濃度的增加，存活細胞越少。當濃度相同時，mAb-CD163/Au+NIR組細胞被殺傷的情況最明顯；通過靶向殺傷瘤周組織內CD163(+)巨噬細胞，可以抑制腫瘤的生長。

附圖說明

圖1是金納米棒溶液的流式圖像。