[發(fā)明專利]一種基于納米酶檢測組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011487460.3 | 申請日： | 2020-12-16 |
| 公開（公告）號： | CN112538518B | 公開（公告）日： | 2023-08-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王光麗;陳彥如;孫冬雪;董玉明 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/48 | 分類號： | C12Q1/48;C12Q1/44;G01N21/78;G01N21/31;B01J31/28 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 納米 檢測 組蛋白 乙酰 轉(zhuǎn)移酶 方法 | ||
1.一種基于納米酶檢測組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
a、CuBi2O4納米材料的合成：將每1.0mmol?Bi(NO3)3·5H2O分散在20mL含有0.7mL濃硝酸的水溶液中，攪拌2h直至溶液澄清透明；在攪拌狀態(tài)下將10mL?0.05mol/L的Cu(NO3)2·3H2O水溶液加入上述澄清溶液中；隨后在持續(xù)攪拌下逐滴加入15mL?1.0mol/L的NaOH水溶液，直至溶液變成藍(lán)綠色沉淀；將最終的混合物轉(zhuǎn)移到特氟龍內(nèi)襯的不銹鋼高壓釜中并在140℃下加熱14h；產(chǎn)物用乙醇和水交替洗滌六次，并在60℃下真空干燥過夜，最終得到的產(chǎn)物為棕色粉末；
b、HAT?p300的測定：將每20μL不同濃度的HAT?p300、20μL?1.0mmol/L的乙酰輔酶A和20μL?1.0mmol/L的底物肽RGKGGKGLGKGGAKA混合并在30℃下孵育80min；孵育結(jié)束后向其中加入20μL?0.1mmol/L的輔酶A適配體溶液，室溫下孵育過夜；孵育結(jié)束后再向其中加入20μL5.0U/mL的限制性核酸外切酶I溶液，37℃下孵育60min；孵育結(jié)束后向混合溶液中加入20μL1.0mg/mL的CuBi2O4溶液，孵育5min；最后，向混合溶液中分別加入20μL?0.1mmol/L的K4[Fe(CN)6]、20μL?5.0mmol/L的納米材料模擬酶的特征顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺、38μL?0.4mol/L?pH＝4.0的NaAc/HAc緩沖溶液以及20μL?1.0mmol/L?H2O2，在35℃下孵育15min后，使用酶標(biāo)儀進(jìn)行光譜掃描，獲得不同濃度樣品在最大波長652nm處的吸光度值，計算得到不同濃度下的吸光度增值A(chǔ)-A0，其中A為該濃度下的吸光度值；A0為濃度為0時的吸光度值；
c、構(gòu)建線性測定模型：利用HAT?p300的濃度與吸光度增值A(chǔ)-A0構(gòu)建線性關(guān)系，得到測定模型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：按照步驟b對待測樣品進(jìn)行孵育處理，測得相應(yīng)的吸光度增量；然后通過步驟c的線性測定模型，計算得到待測樣品中HAT?p300的濃度含量。
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