[發(fā)明專(zhuān)利]一種級(jí)聯(lián)催化的納米多酶及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011482949.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112730355B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳揚(yáng);王莉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/64
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/64;C09K11/06
• 代理公司: 南京蘇高專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

本發(fā)明公開(kāi)了一種級(jí)聯(lián)催化的納米多酶及其制備方法和應(yīng)用，所述的級(jí)聯(lián)催化的納米多酶為包括鋱離子、鐵離子、氯金酸和2,6?吡啶二羧酸通過(guò)溶劑熱一鍋反應(yīng)合成的納米材料。該級(jí)聯(lián)催化的納米多酶具有過(guò)氧化物酶和葡萄糖氧化酶的雙重催化活性，能級(jí)聯(lián)催化氧化葡萄糖及其產(chǎn)物，并通過(guò)鋱離子的發(fā)光顯示葡萄糖的濃度。本發(fā)明還公開(kāi)了該級(jí)聯(lián)催化的納米多酶的制備方法及在測(cè)定葡萄糖濃度方面的應(yīng)用。本發(fā)明的級(jí)聯(lián)催化的納米多酶催化活性高、穩(wěn)定性好、成本低廉，且制備方法簡(jiǎn)單，可作為指示劑或利用級(jí)聯(lián)催化的納米多酶的熒光強(qiáng)度測(cè)定葡萄糖的濃度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種發(fā)光級(jí)聯(lián)催化的納米多酶及其制備方法和應(yīng)用，屬于酶、催化、發(fā)光檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

葡萄糖是人體主要的能量來(lái)源，但是血液中高濃度的葡萄糖導(dǎo)致糖尿病、中風(fēng)、腎衰竭、周?chē)窠?jīng)病變等疾病發(fā)生，測(cè)定血糖以及尿糖對(duì)糖尿病及其它疾病的診斷和治療具有重要意義。酶分析法是臨床上血糖分析的主要方法，其中葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶分析法操作簡(jiǎn)便，是我國(guó)衛(wèi)生部推薦的血糖測(cè)定方法。

利用葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶體系測(cè)定血糖的方法有：鄒靜等報(bào)道了一種用對(duì)苯醌固定葡萄糖氧化酶酶，結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶和愈創(chuàng)木酚反應(yīng)體系熒光測(cè)定血糖的方法(分析試驗(yàn)室，2016，35，1070-1073)。陳婷梅等報(bào)道了一種用葡萄糖氧化酶、辣根過(guò)氧化物酶及底物愈創(chuàng)木酚熒光測(cè)定血糖的方法(分析試驗(yàn)室，2011，30，6-10)。李喬婧等報(bào)道了一種用葡萄糖氧化酶，結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶和酪氨酸反應(yīng)體系熒光測(cè)定血糖的方法(分析化學(xué)，2011，39，1181-1185)。張麗芬等報(bào)道了一種葡萄糖氧化酶，結(jié)合大豆種皮過(guò)氧化物酶和愈創(chuàng)木酚反應(yīng)體系吸光度法測(cè)定血糖的方法(理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè))，2010，46，512-514)。伍莉萍等報(bào)道了一種固定化葡萄糖氧化酶，結(jié)合魯米諾和氯化高鐵血紅素發(fā)光體系，流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血糖的方法(華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，31，422-424)。V.Kalia等報(bào)道了一種用烷基胺玻璃固定化葡萄糖氧化酶，結(jié)合辣根過(guò)氧化酶-安替比林-苯酚顯色體系吸光度法測(cè)定血糖的方法(生物工程學(xué)報(bào)，1998，14，336-338)。中國(guó)專(zhuān)利公布號(hào)CN 109270060A，2019年，韓磊等，一種具有串聯(lián)酶活性的銥納米酶及其應(yīng)用，公開(kāi)了一種具有串聯(lián)酶活性的銥納米酶檢測(cè)葡萄糖的方法；中國(guó)專(zhuān)利公布號(hào)CN 103728287 A，2014年，陳偉等，納米氧化銅模擬過(guò)氧化物酶測(cè)定葡萄糖的熒光分析方法，公開(kāi)了一種用葡萄糖氧化酶，結(jié)合納米氧化銅和對(duì)苯二酚體系熒光檢測(cè)葡萄糖的方法。尹娟娟等報(bào)道了一種用葡萄糖氧化酶，結(jié)合Fe₃O₄納米酶-TMB顯色體系檢測(cè)葡萄糖的方法(分析試驗(yàn)室，2019，38，1486-1489)。

酶分析法中天然酶容易失活、使用周期短、價(jià)格昂貴；酶分析法測(cè)定血糖常需要葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化物酶兩種酶，并且與顯色劑(其底物)一起使用才能產(chǎn)生顏色信號(hào)，顏色信號(hào)的靈敏度較低，影響酶分析法的靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：為解決背景技術(shù)中存在的上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種既具有葡萄糖氧化酶活性又具有過(guò)氧化物酶活性，且能級(jí)聯(lián)催化氧化葡萄糖及其產(chǎn)物，并通過(guò)鋱離子的發(fā)光顯示葡萄糖的濃度的納米多酶。本發(fā)明的第二目的是提供一種所述級(jí)聯(lián)催化的納米多酶的制備方法。本發(fā)明的第三目的是提供所述級(jí)聯(lián)催化的納米多酶在測(cè)定葡萄糖中的應(yīng)用。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種級(jí)聯(lián)催化的納米多酶，所述級(jí)聯(lián)催化的納米多酶為包括鋱離子、鐵離子、氯金酸和2,6-吡啶二羧酸通過(guò)溶劑熱一鍋反應(yīng)合成的納米材料。

其中，所述的級(jí)聯(lián)催化的納米多酶中鐵離子、金為催化中心，鋱離子為發(fā)光中心，利用催化反應(yīng)敏化鋱離子發(fā)光。

其中，所述的級(jí)聯(lián)催化的納米多酶是球形的納米粒子，粒徑為50-200nm。

本發(fā)明所述的級(jí)聯(lián)催化的納米多酶的制備方法，包括以下步驟：

(1)將硝酸鋱水溶液和硝酸鐵水溶液加入到含2,6-吡啶二羧酸的N，N'二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，攪拌；