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[發(fā)明專利]天然除草劑thaxtomins的高產(chǎn)菌株及其制備方法和用途有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 202011482864.3 申請日: 2020-12-16
公開(公告)號: CN112501101B 公開(公告)日: 2022-10-04
發(fā)明(設(shè)計)人: 牛國清;黃鵬舉;孔德坤;王霞;王美燕;霍清雯 申請(專利權(quán))人: 西南大學(xué)
主分類號: C12N1/21 分類號: C12N1/21;C12N15/53;C12N15/52;C12N15/65;C12N15/76;C12P17/16;C12R1/47
代理公司: 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218 代理人: 秦華
地址: 400715*** 國省代碼: 重慶;50
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 天然 除草劑 thaxtomins 高產(chǎn) 菌株 及其 制備 方法 用途
【權(quán)利要求書】:

1.一株天然除草劑thaxtomins的高產(chǎn)菌株,其特征在于,該菌株來源于S.albusJ1074,用neo基因替換掉cebR基因,同時含有thaxtomin生物合成基因簇,其中thaxtomin生物合成基因簇依次包括:P450單加氧酶txtC基因,MbtH-like蛋白txtH基因,非核糖體肽類合成酶txtB基因,非核糖體肽類合成酶txtA基因,PrpoD啟動子,正向調(diào)控因子txtR基因,P450單加氧酶txtE基因,一氧化氮合成酶txtD基因;所述PrpoD啟動子來源于小白鏈霉菌J1074。

2.如權(quán)利要求1所述天然除草劑thaxtomins的高產(chǎn)菌株,其特征在于,所述thaxtomin基因簇來源為瘡痂鏈霉菌ATCC 49173。

3.如權(quán)利要求1所述天然除草劑thaxtomins的高產(chǎn)菌株,其特征在于,所述txtR的基因序列如SEQ ID NO:39所示。

4.如權(quán)利要求3所述天然除草劑thaxtomins的高產(chǎn)菌株,其特征在于,制備方法為,

thaxtomin基因簇的制備:PCR分別擴增得到SEQ ID NO:11-15所示的五個片段,通過酶切連接將其拼裝成完整的thaxtomin基因簇,再通過λ-RED介導(dǎo)的同源重組將基因簇轉(zhuǎn)換到鏈霉菌整合載體上,獲得帶有thaxtomin基因簇的重組質(zhì)粒A;

cebR基因敲除的突變菌株的制備:通過溫敏型質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重組雙交換,將小白鏈霉菌 J1074 CGMCC 4.7233基因組中的cebR基因替換為卡那霉素抗性基因neo,獲得cebR基因敲除的突變菌株J1074ΔcebR;

Thaxtomin生物合成基因簇的制備:將SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38,與線性化的pBluescript II KS(-)載體同源重組,得到含有SEQ ID NO:36,39,37和 38片段的重組載體B;然后將重組載體B上的SEQ ID NO:36,39,37和 38片段通過內(nèi)切酶切下,再通過λ-RED介導(dǎo)的同源重組系統(tǒng),將SEQ ID NO:36,39,37和 38片段與重組質(zhì)粒A進行同源重組,獲得帶有thaxtomin生物合成基因簇的重組質(zhì)粒C;

菌株的篩選:將重組質(zhì)粒C通過鏈霉菌-大腸桿菌穿梭系統(tǒng)接合轉(zhuǎn)移至突變菌株J1074ΔcebR中,通過安普霉素篩選突變株,最終獲得thaxtomin的高產(chǎn)菌株。

5.權(quán)利要求1-4任一所述天然除草劑thaxtomins的高產(chǎn)菌株用于制備thaxtomins的用途。

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