[發明專利]一種交聯抗生素的特定脫礦細胞外基質支架的制備方法

有效

• 申請號: 202011482219.1
• 申請日: 2020-12-15
• 公開（公告）號: CN112618797B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 林賢豐;顧辰輝;方斌;范順武
• 申請（專利權）人: 浙江大學醫學院附屬邵逸夫醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/00;A61L27/50;A61L27/54
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王敏

1.一種交聯抗生素的特定脫礦細胞外基質支架的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)從動物富含松質骨部位獲取直徑為4-8mm的松質骨顆粒；

(2)脫細胞：

①將步驟(1)獲取的松質骨顆粒，切成2-4mm厚度的圓柱體，獲得松質骨塊；

②將步驟①獲得的松質骨塊用自來水沖洗1h，包裝在包埋盒中，然后浸泡在0.6％(v/v)過氧乙酸超純水中1h；

③將包埋盒轉移至過濾除菌后的1％(v/v)Triton-X100溶液的燒瓶中，100rpm，4℃震動12-48h；

④用500ml滅菌水清洗包埋盒，并持續攪拌1h，重復兩次；

⑤將松質骨塊加入1％(w/v)SDS水溶液中，100rpm，4℃震動12-48h，清洗包埋盒，獲得松質骨ECM；

⑥將松質骨ECM浸泡于10％EDTA脫鈣液中，放入快速超聲脫鈣機中，在4℃下脫鈣2-6h；

⑦將ECM骨塊用自來水沖洗，輻射消毒，并凍干保存，獲得松質骨細胞外支架；

(3)松質骨細胞外支架復合抗生素：

將30mg材料粉末加入到抗生素溶液中，浸泡1h，使兩者充分混勻；加入等體積的EDC-NHS混合溶液，所述EDC-NHS混合溶液中EDC濃度為16mM，NHS濃度為4mM，常溫下反應12-24h；反應完成的材料用去離子水清洗三遍，9000rpm/min離心5min，棄去上清液，凍干保存，獲得交聯抗生素的特定脫礦細胞外基質支架；

所述抗生素溶液為2-20mg/ml的萬古霉素溶液，或2-20mg/ml的頭孢曲松溶液，或2-20mg/ml的頭孢吡肟溶液。

2.根據權利要求1所述的一種交聯抗生素的特定脫礦細胞外基質支架的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述動物為大型哺乳動物，包括牛、豬。

3.根據權利要求1所述的一種交聯抗生素的特定脫礦細胞外基質支架的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述富含松質骨部位包括脊柱、肋骨、肩胛、骨盆。

4.根據權利要求1所述的一種交聯抗生素的特定脫礦細胞外基質支架的制備方法，其特征在于，步驟(2)③所述1％(v/v)Triton-X100用0.22μm濾頭過濾除菌。

5.根據權利要求1所述的一種交聯抗生素的特定脫礦細胞外基質支架的制備方法，其特征在于，步驟(2)⑦所述輻射劑量為250kGy。