[發明專利]鑒別寬體金線蛭的PCR檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202011481754.5
• 申請日: 2020-12-15
• 公開（公告）號: CN112481394B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 張顯;蔣倩倩;羅倫
• 申請（專利權）人: 瀘州百草堂健康產品有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發明公開了一種鑒別寬體金線蛭的PCR檢測試劑盒。屬于核酸檢測領域。本發明的試劑盒主要依賴其特異性的引物對(序列如SEQ?ID?NO.1～2所示)，可對寬體金線蛭進行檢測鑒別；檢測快速、準確，而不對其它水蛭品種產生非特異性反應，也不會受寄主血液的干擾，一次反應可以將目標水蛭品種鑒別出來。

技術領域

本發明屬于核酸檢測領域。

背景技術

水蛭俗稱螞蟥，是蛭綱動物的總稱，是一味用于破血通經、逐瘀消癮的傳統中藥，在臨床廣泛用于中風后遺證、腦血栓等的治療。國際上將吸食哺乳動物血液，其唾液腺分泌物中含有水蛭素等多種生物活性物質，并且在醫藥上具有廣闊應用前景的蛭類動物統稱為醫學蛭類。《中國藥典》2015版收載的入藥品種為水蛭科的寬體金線蛭(Whitmania?pigraWhitman)、水蛭(Hirudonipponia?Whitman，以下稱為日本醫蛭)及尖細金線蛭(WhitmaniaacranulataWhitman)(國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015.)。然而，水蛭的市場需求和高昂的價格導致市場上菲牛蛭(Poecilobdella?manillensis?Lesson)、棒紋牛蛭(Poecilobdella?javanica?Wahlberg)、光潤金線蛭(Whitmania?laevis?Baird)等偽品以次充好的現象十分普遍，且這些近緣物種僅依靠形態特征難以區分和鑒定，影響了藥品的安全性和有效性。

傳統的水蛭鑒定方法基于完整水蛭的形態特征或薄層色譜對其進行分析，近代的分析方法多依賴于高成本、復雜的儀器，如高效液相色譜指紋圖譜和氣相色譜/質譜聯用技術被廣泛應用于特征小分子的檢測，而電泳或生物質譜聯用技術常被應用于特征蛋白或特定肽段的檢測。

發明內容

本發明要解決的問題是：提供一種鑒別寬體金線蛭的PCR檢測試劑盒。

本發明的技術方案如下：

一種鑒別寬體金線蛭的PCR引物，引物序列如SEQ?ID?NO.1～2所示。

前引物在制備寬體金線蛭鑒別試劑盒中的用途。

如前述的用途，所述試劑盒除包括序列如SEQ?ID?NO.1～2所示的引物以外，還包括Taq?DNA聚合酶、dNTP、Mg²⁺、PCR反應緩沖液。

如前述的用途，所述試劑盒工作時的退火溫度為60℃。

如前述的用途，所述試劑盒是將寬體金線蛭與日本醫蛭、尖細金線蛭、菲牛蛭相區分的試劑盒。

一種鑒別寬體金線蛭的PCR檢測試劑盒，所述試劑盒包括序列如SEQ?ID?NO.1～2所示的引物。

進一步地，所述試劑盒還包括Taq?DNA聚合酶、dNTP、Mg²⁺、PCR反應緩沖液。

進一步地，所述試劑盒工作時的退火溫度為60℃。

前述的引物在鑒別寬體金線蛭中的用途。

進一步地，所述鑒別是將寬體金線蛭與日本醫蛭、尖細金線蛭、菲牛蛭相區分。

本發明的有益效果：

首先，本發明引物對特異性良好，利用其進行PCR，不與目標以外的DNA片段產生非特異性反應，并且擴增得到的PCR產物可以明顯區分，可以用于快速、準確的鑒別寬體金線蛭品種真偽，而不對其它水蛭品種產生非特異性反應，一次反應可以將目標水蛭品種鑒別出來。

其次，本發明的引物對靈敏度高。在使用凝膠電泳成像時，其最低檢測限低至0.1ng?DNA。