[發明專利]一種全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法

有效

• 申請號: 202011475891.8
• 申請日: 2020-12-15
• 公開（公告）號: CN112458143B
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 陳本順;石利平;何偉;葉金星;徐春濤;程瑞華;孫偉振;李大偉;張維冰;徐秋斌;戚陳陳;龐小召
• 申請（專利權）人: 江蘇阿爾法藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P17/14;C12N1/16;C12R1/645
• 代理公司: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司 11108
• 代理人: 張洪年

1.一種全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法，其特征在于：該方法以全細胞Schizosaccharomyces?octosporus?ATCC2479為催化劑，利用式II所示化合物為原料，通過不對稱還原反應制備得到依折麥布手性中間體，其中所述催化劑為全細胞Schizosaccharomyces?octosporus?ATCC2479的凍干細胞，

其中所述全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法包括以下步驟：

S1：制備Schizosaccharomyces?octosporus?ATCC2479凍干細胞；

S2：將式II所示化合物、Schizosaccharomyces?octosporus?ATCC2479凍干細胞、酶催化輔酶循環酶、輔酶循環氫供體、pH值為7.0的緩沖溶液、助溶劑混合后，攪拌下培養，得到含有式I所示化合物的反應后溶液體系；

所述攪拌下培養的溫度為33℃；所述酶催化輔酶循環酶為異丙醇脫氫酶；所述輔酶循環氫供體為NADP+；所述助溶劑為異丙醇；所述緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液；

所述攪拌下培養為分階段培養法，具體包括兩個階段，第一階段為6小時；當攪拌培養6小時后，記錄體系總液量，然后通過減壓蒸餾的方式完全去除體系內的丙酮，去除完畢后，以異丙醇補至總液量全量；然后繼續第二階段攪拌培養，第二階段為15小時，反應完成后得到含有式I所示化合物的反應后溶液體系。

2.根據權利要求1所述的全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法，其特征在于，所述緩沖溶液為0.1-0.2mol/L的磷酸鹽緩沖溶液。

3.根據權利要求1所述的全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法，其特征在于，所述Schizosaccharomyces?octosporus?ATCC2479凍干細胞的制備方法是：將Schizosaccharomyces?octosporus?ATCC2479的菌株接種于酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)液體培養基中，攪拌培養得到菌液后，分離得到菌體，凍干獲得Schizosaccharomycesoctosporus?ATCC2479凍干細胞。

4.根據權利要求3所述的全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法，其特征在于：所述酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)液體培養基中包括1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖，所述培養基的pH值為5.5。

5.根據權利要求1所述的全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法，其特征在于：所述凍干細胞、輔酶循環氫供體、酶催化輔酶循環酶之間的摩爾比為1：0.1～0.2：0.5～1。

6.根據權利要求1所述的全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法，其特征在于：所述凍干細胞與式II所示化合物的摩爾比為1:0.1～1。

7.根據權利要求1所述的全細胞催化合成依折麥布手性中間體的方法，其特征在于：式II所示化合物、助溶劑、緩沖溶液的摩爾比為1:10～100:10～60。