[發(fā)明專利]一種測(cè)定蛋白溶液中鏈霉素含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011473591.6
• 申請(qǐng)日: 2020-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN112763592A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱子豐;顧凱;盧彥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海明捷醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 南京常青藤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32286
• 代理人: 毛洪梅

本發(fā)明提供一種測(cè)定蛋白溶液中鏈霉素含量的方法，S1、取鏈霉素對(duì)照品適量，以0.3％乙酸水溶液為稀釋劑，配制適當(dāng)濃度的鏈霉素對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品溶液；S2、取蛋白溶液，以0.3％乙酸水溶液為溶劑，配制供試品溶液；S3、取鏈霉素對(duì)照品線性溶液，經(jīng)LC?MS/MS法檢測(cè)，分別獲得對(duì)照品溶液中鏈霉素的峰面積，并與溶液濃度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合；S4、取供試品溶液經(jīng)LC?MS/MS法檢測(cè)，獲得供試品溶液的峰面積，用外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算供試品溶液中鏈霉素的含量。本發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)鏈霉素的準(zhǔn)確定量，具有檢測(cè)時(shí)間短、準(zhǔn)確度好、精密度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及一種測(cè)定蛋白溶液中鏈霉素含量的方法。

背景技術(shù)

鏈霉素是抗菌素的一種，屬于氨基糖苷類抗生素，是很常用的抗菌藥品，但是殘留在藥品中的鏈霉素對(duì)人體會(huì)有較大的毒副作用，嚴(yán)重可導(dǎo)致過敏性休克和耳聾，并且還具有潛在的致畸作用，因此對(duì)蛋白中鏈霉素殘留測(cè)試顯得尤為重要。目前，關(guān)于鏈霉素含量的測(cè)定主要有高效液相色譜法、微生物法、免疫分析法、分光光度法等，但是免疫分析法容易產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果，微生物法和分光光度法不能準(zhǔn)確定量，傳統(tǒng)高效液相色譜法測(cè)定對(duì)于蛋白溶液中鏈霉素殘留量測(cè)定來說，靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足要求，且分析時(shí)間過長。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種測(cè)定蛋白溶液中鏈霉素含量的方法。

本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

一種測(cè)定蛋白溶液中鏈霉素含量的方法，包括如下步驟：

S1、取鏈霉素對(duì)照品適量，以0.3％乙酸水溶液為稀釋劑，配制適當(dāng)濃度的鏈霉素對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品溶液；

S2、取蛋白溶液，以0.3％乙酸水溶液為溶劑，配制供試品溶液；

S3、取鏈霉素對(duì)照品線性溶液，經(jīng)LC-MS/MS法檢測(cè)，分別獲得對(duì)照品溶液中鏈霉素的峰面積，并與溶液濃度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合；

S4、取供試品溶液經(jīng)LC-MS/MS法檢測(cè)，獲得供試品溶液的峰面積，用外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算供試品溶液中鏈霉素的含量；

其中S3步驟和S4步驟中LC-MS/MS法的色譜條件為：采用色譜柱為HSS T3，規(guī)格為1.8μm，3.0×100mm；柱溫為20-30℃；進(jìn)樣量為15-30μL；進(jìn)樣盤溫度需控制為4-8℃；檢測(cè)器為質(zhì)譜檢測(cè)器，離子源為ESI，正離子模式，離子對(duì)為335/160；

以0.1％甲酸水溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，流速為0.25mL/min；梯度洗脫程序?yàn)椋?-2min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為60％；2-3min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)由60％變化至100％；3-4min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為100％；4-4.1min流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)由100％變化至60％；4.1-6min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為60％。梯度洗脫程序如下表所示：