[發明專利]與2型糖尿病胰島β細胞受損表型相關的血清/血漿miRNA組合標志物及其應用

在審

• 申請號: 202011471579.1
• 申請日: 2020-12-15
• 公開（公告）號: CN114634977A
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發明（設計）人: 張峻峰;黃振;石子玉;王晨;孫琦;陳江寧
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11;C12N15/113
• 代理公司: 江蘇斐多律師事務所 32332
• 代理人: 張佳妮

本發明公開了一種與2型糖尿病胰島β細胞受損表型相關的血清/血漿miRNA組合標志物，包括miR?4455和/或miR?4530。本發明還提供了用于胰島β細胞受損型2型糖尿病檢測的熒光定量檢測引物組合，包括miR?4455和miR?4530的逆轉錄引物、正向引物和反向引物。以及上述組合標志物和引物組合在制備胰島β細胞受損型2型糖尿病診斷試劑盒中的應用。本發明公開的標志物能夠在早期對胰島β細胞受損型2型糖尿病進行分型識別診斷，準確地將其與胰島β細胞正常型2型糖尿病區分開，僅需提供血樣即可進行，顯著提高了臨床應用的可行性和簡易性，為特定表型2型糖尿病的早期預防、診斷以及個體化精準治療方案提供科學依據和指導。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，涉及一種基于血清/血漿miRNA的生物標志物用于2型糖尿病β細胞受損分型診斷的方法。

背景技術

2型糖尿病(T2DM)作為威脅民眾健康最主要的慢性疾病之一，是由復雜的遺傳-環境因素相互作用引起的多器官代謝紊亂疾病，以慢性高血糖及胰島素完全或部分分泌不足引起的糖、脂質和蛋白質代謝紊亂為主要特征，常常對多個器官造成不利的影響，包括視網膜病變、腎病、神經病變和心腦血管疾病等糖尿病并發癥，嚴重危及患者生命。根據國際糖尿病聯合會(IDF)的報道，全球有3.87億人患有糖尿病，預計到2035年將增加到5.92億人。中國糖尿病患病率在過去幾十年間也急劇增長，從1980年的0.67％飆升至2010年的11.6％，患病人數達到1.164億，而且這一數字仍在迅速增長，可見T2DM的防控迫在眉睫。

但是中國70％的糖尿病患者并不知曉自身的疾病狀態，僅有26％的患者接受治療，而在他們當中只僅40％的人群血糖控制良好。這很大程度上歸因于糖尿病的復雜病因以及患者在疾病表型、治療應答和預后恢復等方面有較大的個體差異。因此，及時準確地判定患者的病因和發病進程將大大有助于改善糖尿病的防控形勢。

目前T2DM的臨床診斷普遍基于美國糖尿病協會(ADA)指南：空腹血糖水平(FPG)≥7.1mmol/L，口服75g葡萄糖耐量試驗(OGTT)2小時后血糖水平≥11.1mmol/L，糖化血紅蛋白水平≥6.5％。上述診斷指標，聯合生活方式(吸煙、飲酒、體育活動、飲食結構)，物理因素(年齡、性別、血壓、BMI、腰圍)和遺傳因素(種族、家族遺傳)等非侵入性自我評估篩查工具，可顯著提高糖調節障礙或T2DM的早期診斷率。臨床研究顯示綜合使用一些生化指標如脂質代謝產物(高密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯)，C反應蛋白、肝酶，白細胞計數等可提高T2DM的預測準確性。但是，這些代謝標志物還不能特異性地將T2DM和其他代謝疾病區分開來，也無法有效判定T2DM的具體分型。其中，胰島β細胞通過分泌胰島素在葡萄糖穩態中發揮核心作用。當胰島β細胞功能受損甚至凋亡時，胰島素分泌減少可直接導致T2DM的發生發展，這說明胰島β細胞功能受損是T2DM的關鍵發病基礎，及時識別β細胞功能受損并進行有效干預就有希望實現這類T2DM的逆轉。因此，開發可用于判別胰島β細胞受損型T2DM的精準防診治生物標志物，實現以病理生理為基礎的糖尿病個體化診療仍然是關鍵需求。

MicroRNA(miRNA)是一類由21-23個核苷酸組成的單鏈非編碼RNA，其廣泛調控細胞增殖分化，組織重塑及器官代謝等生物學事件，miRNA的表達變化能靈敏反映多種生理或病理狀態，展現出重要的臨床應用價值。血清/血漿中循環miRNA作為新型生物標志物，具有創傷小、穩定性高、特異性和靈敏性好、易于檢測等優勢，是對傳統生物標志物的重要補充。作為完美契合精準醫學要求的新型疾病標志物和指紋圖譜，循環miRNA有望為T2DM的分子分型、個體化治療和預后判斷等方面提供新的判斷依據，從而改善目前疾病篩查和檢測的精度和準確性。例如，利用血清/血漿miRNA對胰腺癌進行早期診斷已取得突破性進展，相關診斷試劑盒已經獲批上市。。然而，血清/血漿miRNA表達譜在用于糖尿病早期分型診斷方面的研究較少，基于胰島β細胞功能受損的特定表型T2DM患者的miRNA表達譜特征有待進一步研究。

因此，成功研發胰島β細胞功能受損特定表型的糖尿病精準預測的miRNA標志物，將有利于開創糖尿病特定表型的個體化治療的全新局面。

發明內容