[發(fā)明專利]一種基于COI基因片段的飄魚和寡鱗飄魚的分子鑒別方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011471296.7
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112522422A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李大命;蔡永久;劉洋;陸建明;張偉;穆新武;花少鵬;李春寧;朱凜
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省淡水水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32249
• 代理人: 徐激波

1.一種飄魚和寡鱗飄魚的分子鑒別方法，其特征在于：包含以下步驟，

（1）分別提取待鑒定的飄魚和寡鱗飄魚基因組DNA；

（2）以提取的基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增飄魚和寡鱗飄魚的細(xì)胞色素氧化酶亞基I基因，PCR擴(kuò)增上游引物如序列SEQ ID NO.1所示，下游引物如序列SEQ ID NO.2所示；

（3）擴(kuò)增產(chǎn)物純化后，直接測序，飄魚的COI基因擴(kuò)增產(chǎn)物如SEQ ID NO.3所示，寡鱗飄魚的COI基因擴(kuò)增產(chǎn)物如SEQ ID NO.4所示；COI基因第4位點(diǎn)第6位點(diǎn)堿基分別是T和A為飄魚，COI基因第4位點(diǎn)第6位點(diǎn)堿基分別是C和G為寡鱗飄魚。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子鑒別方法，其特征在于：所述的PCR的反應(yīng)體系為50 mL：80ng/μL的模板DNA 1 mL，PCR緩沖液 5 mL，dNTP混合液4 mL，每種dNTP 0.1mmol/L， 10 μmol/L的上、下游引物各1 mL，2mL 2.5 IU的Taq酶；雙蒸水36mL；所述的PCR緩沖液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0， 0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01%（g/100ml）明膠組成；PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序為：94 ℃預(yù)變性4 min，94 ℃變性40 s，57 ℃退火50 s，72 ℃延伸60 s，經(jīng)30個循環(huán)后再72 ℃延伸10 min。

3.一種用于飄魚和寡鱗飄魚的分子鑒別的引物對，其特征在于：上游引物如序列SEQID NO.1所示，下游引物如序列SEQ ID NO.2所示。

4.權(quán)利要求3所述的引物對在分子遺傳鑒別飄魚和寡鱗飄魚中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求3所述的引物對在制備飄魚和寡鱗飄魚分子鑒別試劑中的應(yīng)用。

6.一種飄魚和寡鱗飄魚分子鑒別試劑，其特征在于：包含權(quán)利要求3所述的引物對。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的飄魚和寡鱗飄魚分子鑒別試劑，其特征在于：所述的飄魚和寡鱗飄魚分子鑒別試劑還包括PCR緩沖液和dNTP混合液，所述的PCR緩沖液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0， 0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01%明膠組成。