[發(fā)明專(zhuān)利]RGDfK抑制PDL1的檢測(cè)方法及其在制備抗PDL1藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011467072.9
• 申請(qǐng)日: 2020-12-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112481362B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范義輝;毛仁芳;馬盼盼;金鑫鑫
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6851
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6851;G01N33/68;A61K38/12;A61P35/00
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 徐思波

本發(fā)明提供一種RGDfK抑制PDL1的檢測(cè)方法，包括如下步驟：（1）探究腫瘤細(xì)胞表面PDL1分子的表達(dá)調(diào)控機(jī)制：利用小分子抑制劑處理腫瘤細(xì)胞，分別通過(guò)基因和蛋白水平來(lái)表征PDL1的表達(dá)；（2）檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中ERK的磷酸化水平；（3）驗(yàn)證RGDfK對(duì)腫瘤細(xì)胞PDL1的抑制作用：用RGDfK抑制劑處理腫瘤細(xì)胞后，用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中PDL1的蛋白表達(dá)水平。本發(fā)明提出整合素αvβ3的抑制劑RGDfK可以增強(qiáng)T細(xì)胞在乳腺癌中的免疫治療效果，有望為臨床上治療乳腺癌提供可行性和理論依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種RGDfK抑制PDL1的檢測(cè)方法及其在制備抗PDL1藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

乳腺癌是一種惡性腫瘤，在女性群體中發(fā)病率很高。近年來(lái)，針對(duì)乳腺癌的治療已經(jīng)取得了顯著的臨床效果，治療方式主要有手術(shù)、放療和化療，然后5年生存率普遍較低，特別是中晚期患者。隨著腫瘤生物學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展，癌癥免疫治療已成為近年來(lái)腫瘤治療領(lǐng)域的新研究熱點(diǎn)，被喻為第四種腫瘤治療模式，主要是指應(yīng)用免疫學(xué)原理和方法，通過(guò)激活體內(nèi)的免疫細(xì)胞和增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答，特異性地清除腫瘤微小殘留病灶、抑制腫瘤生長(zhǎng)，打破免疫耐受的治療方法。腫瘤免疫治療就是要克服腫瘤免疫逃逸的機(jī)制，從而重新喚醒免疫細(xì)胞來(lái)清除癌細(xì)胞。一般地，腫瘤患者機(jī)體免疫反應(yīng)處于抑制狀態(tài)，一方面是由于體內(nèi)細(xì)胞毒性T細(xì)胞相關(guān)抗原及輔助性T細(xì)胞不足，另一方面是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的免疫抑制分子，導(dǎo)致免疫耐受。有研究顯示，免疫檢查點(diǎn)程序性死亡受體1（programmed death 1，PD1）及其配體1（PDL1）參與形成腫瘤微環(huán)境，能顯著抑制T細(xì)胞活性，促使腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和殺傷。PD1是一種細(xì)胞表面受體，屬于免疫球蛋白超家族，僅在活化的T淋巴細(xì)胞上表達(dá)。在結(jié)構(gòu)上，成熟的PD1蛋白包含細(xì)胞外識(shí)別結(jié)構(gòu)域、跨膜區(qū)以及細(xì)胞內(nèi)尾部。功能上，PD1在抑制T細(xì)胞活性中起重要作用，具有兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)的尾部，分別是免疫受體酪氨酸抑制基序（immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif，ITIM）和一個(gè)基于免疫受體酪氨酸的轉(zhuǎn)換基序（immunoreceptor tyrosine-based switch motif，ITSM），均負(fù)調(diào)節(jié)T細(xì)胞受體信號(hào)。

乳腺癌是危害女性身體健康最常見(jiàn)的惡性腫瘤，而轉(zhuǎn)移是乳腺癌臨床治療失敗的主要原因。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial mesenchymal transformation，EMT）是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟，參與乳腺癌的發(fā)生、浸潤(rùn)等多個(gè)惡變過(guò)程。纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）是細(xì)胞外基質(zhì)中一種功能性糖蛋白。臨床數(shù)據(jù)研究表明，F(xiàn)N在正常成人乳腺組織中低表達(dá)，而在腫瘤基質(zhì)中表達(dá)水平顯著升高。整合素是一種位于細(xì)胞表明介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)傳導(dǎo)的跨膜糖蛋白受體，F(xiàn)N可通過(guò)RGD位點(diǎn)與整合素受體結(jié)合調(diào)控細(xì)胞多種生理功能。

隨著信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡等分子生物學(xué)方法在腫瘤研究中的應(yīng)用，乳腺癌分子靶點(diǎn)和靶向治療逐漸成為抗乳腺癌研究的趨勢(shì)和熱點(diǎn)。鑒于傳統(tǒng)治療方法的局限性，免疫療法以其高特異性和記憶性，對(duì)改善腫瘤患者的生存率和預(yù)后情況具有潛在作用。免疫檢查點(diǎn)是阻礙機(jī)體免疫細(xì)胞抗腫瘤的主要原因，也是發(fā)生免疫逃逸的罪魁禍?zhǔn)住Ｄ壳搬槍?duì)免疫檢查點(diǎn)，主要是采用單克隆抗體抑制劑的方法來(lái)提高抗腫瘤的效果。PDL1和PDL2是目前腫瘤免疫治療，特別是免疫檢查點(diǎn)阻斷療法的核心靶點(diǎn)。抑制PDL1和PDL2功能可以激活T細(xì)胞的抗腫瘤免疫，殺傷腫瘤細(xì)胞。Cyclo(-RGDfK)是整合素αvβ3高效選擇性環(huán)肽類(lèi)抑制劑，RGDfK的抗腫瘤作用已在多種腫瘤治療中得到廣泛開(kāi)展，本發(fā)明旨在研究RGDfK在制備抗PD-L1藥物中的應(yīng)用，為Cyclo-RGDfK的臨床實(shí)踐提供更多的理論依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種RGDfK抑制PDL1的檢測(cè)方法及其在制備抗PDL1藥物中的應(yīng)用，為Cyclo-RGDfK的臨床實(shí)踐提供更多的理論依據(jù)。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的實(shí)施例提供一種RGDfK抑制PDL1的檢測(cè)方法，包括如下步驟：