[發明專利]一種去除新生牛血清內毒素的工藝

在審

• 申請號: 202011466034.1
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112662610A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 李佳亮;孫浩
• 申請（專利權）人: 五河縣鑫盛生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;B01D36/00;B01D37/00
• 代理公司: 合肥中博知信知識產權代理有限公司 34142
• 代理人: 管秋香

本發明公開了一種去除新生牛血清內毒素的工藝，包括如下步驟：取新生牛血清，且該新生牛血清為小公牛喂食過初乳4?14天且含大量脂類、內毒素和血紅蛋白超標的血清；對新生牛血清預濾處理，預濾處理得到預濾上清液；向預濾上清液中加入活性炭進行吸附，活性炭的質量分數為上清液質量的0.5?2％，待吸附50?90min后，進行中濾處理；中濾處理后加入內毒素吸附材料進行吸附處理，并在吸附處理進行后濾處理，后濾處理后即得到去除了內毒素的新生牛血清。本發明采用預濾處理、中濾處理以及后濾處理配合內毒素吸附材料，能更好的去除新生牛血清中的內毒素。

技術領域

本發明涉及生物領域，具體為一種去除新生牛血清內毒素的工藝。

背景技術

豐富的細胞生長必須的營養成份，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。它提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。它還能夠提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。

牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，含有內毒素是革蘭氏陰性菌的菌體中存在的毒性物質的總稱，是多種革蘭氏陰性菌的細胞壁成分，由菌體裂解后釋出，又稱之為“熱原”。其化學成分有磷脂多糖-蛋白質復合物，其毒性成分主要為類脂質A。內毒素位于細胞壁的最外層、覆蓋于細胞壁的黏肽上。各種細菌的內毒素大都具有一定的毒性，可引起發熱、微循環障礙、內毒素休克及播散性血管內凝血等。因此，含有內毒素的血清不能用于疫苗的生產，只有去除內毒素、保留血清中的營養成分，才可以使這類血清用于疫苗生產，從而變廢為寶，得到充分利用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種去除新生牛血清內毒素的工藝，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種去除新生牛血清內毒素的工藝，包括如下步驟：

S1：取新生牛血清，且該新生牛血清為小公牛喂食過初乳4-14天且含大量脂類、內毒素和血紅蛋白超標的血清；

S2：對新生牛血清預濾處理，預濾處理得到預濾上清液；

S3：向預濾上清液中加入活性炭進行吸附，活性炭的質量分數為上清液質量的0.5-2％，待吸附50-90min后，進行中濾處理；

S4：中濾處理后加入內毒素吸附材料進行吸附處理，并在吸附處理進行后濾處理，后濾處理后即得到去除了內毒素的新生牛血清。

優選的，S2中預濾處理具體包括步驟：S21：濾除牛血清中纖維蛋白并得濾除液；S22：將濾除液經超濾柱分離成大分子復合物與游離分子；S23：向大分子復合物內加入免疫球蛋白、脂蛋白并聚合成絮狀沉淀；S24：將該絮狀沉淀經離心、澄清過濾得預濾液，并將該預濾液與游離分子合并得到預濾上清液。

優選的，述S3中中濾處理是通過將處理液離心后得上清液，并將該上清液經粗濾膜過濾。

優選的，S3中活性炭為活性炭顆粒和/或粉末，通過將活性炭顆粒和/或粉末加入血清并柔和攪拌至均勻，經中濾處理去除活性炭并獲得中濾處理原料。

優選的，S4中內毒素吸附材料為殼聚糖微球、甘氨酸經偶聯反應而成。

優選的，S4中后濾處理包括使用0.8μm濾膜、0.65μm濾膜、0.45μm濾膜、0.1μm濾膜依次逐級過濾，從而獲得去除了內毒素的新生牛血清。

優選的，活性炭顆粒和/或粉末加入血清并柔和攪拌至均勻是在攪拌設備中進行，攪拌設備包括攪拌箱、機架、第一攪拌結構與第二攪拌結構，攪拌箱固定在機架端部，攪拌箱內部上、下兩側分別裝設有第一攪拌結構、第二攪拌結構；所述第一攪拌結構包括滑軌、齒板、齒輪與第一攪拌桿，滑軌固定在攪拌箱頂壁，滑軌內側設有彈簧，滑軌上滑接有齒板；所述齒輪通過支架裝設于齒板下側且與齒板嚙合，齒輪端部連接有第一攪拌桿，且第一攪拌桿可在齒輪、齒板相互嚙合時擺動。