[發明專利]一種微載體培養細胞計數方法

在審

• 申請號: 202011465983.8
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112485179A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 孫振華;左麗娜;黃哲;黃珂
• 申請（專利權）人: 江蘇普瑞康生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10;G01N15/14;G01N1/34;G01N1/30
• 代理公司: 北京商專潤文專利代理事務所(普通合伙) 11317
• 代理人: 邢若蘭

1.一種微載體培養細胞計數方法，其特征在于：包括：

取樣離心：取適量微載體培養得到細胞混懸液，離心后去上清獲得沉淀物；

釋放重懸：所述沉淀物加適量溶解劑，和洗滌劑混液重懸后靜置；

染色計數：加染色劑染色后混勻計數。

2.根據權利要求1所述的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：所述溶解劑為酸性試劑或堿性試劑，其中，酸性試劑選自檸檬酸、磷酸、檸檬酸鹽、磷酸鹽、馬來酸鹽、甘氨酸、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、乙酸、氯化氫、甲酸、乳酸、蘋果酸和抗壞血酸的生物緩沖劑中的至少一種；堿性試劑選自碳酸氫鈉、三乙胺等胺類、吡啶、哌啶、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、氫氧化鈣和氨中的至少一種。

3.根據權利要求1-2所述的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：所述洗滌劑選自Triton X-15，Triton X-100，Triton X-114，Triton N-57，Triton N-101，Triton QS-15，Igepal CA630，NP-40和Brij 96中的至少一種。

4.根據權利要求3所述的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：所述微載體與細胞培養的時間為1-15天，優選3-6天。

5.根據權利要求4所述的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：所述離心速度為500-5000rpm，優選1000-2000rpm。

6.根據權利要求5的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：所述酸性試劑調節沉淀物重懸液pH值至1.5-4.5，優選2.0-3.0；濃度為0.01M-1M，優選0.1M-0.5M；所述洗滌劑濃度為0.05-5％(v/v)，優選0.1-2％(v/v)。

7.根據權利要求6所述的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：沉淀物重懸后靜置1-30min，優選為4-7min，更優選為5min。

8.根據權利要求7所述的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：所述染色劑為結晶紫-檸檬酸染色液、臺盼藍染色液、龍膽紫溶液、健那綠溶液、甲基綠、吡羅紅、醋酸洋紅、蘇木精等染色液中的至少一種。

9.根據權利要求8所述的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：所述結晶紫染色液濃度為0.01mg-10mg/mL，優選為1mg/mL；染色時間為1-10分鐘，優選為3分鐘。

10.據權利要求9所述的微載體培養細胞計數方法，其特征在于：所述計數方法為血細胞計數法，臺盼藍細胞儀計數法和流式細胞儀計數法中的至少一種。