[發明專利]一種檢測神經元特異性烯醇化酶的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202011465197.8
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112630278B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 王平;湯春園;王淑君;周鍇威;任杰;楊青山;李月云;劉青
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N33/573
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于新型納米材料與生物傳感檢測技術領域，提供了一種檢測神經元特異性烯醇化酶的夾心電化學免疫傳感器的制備方法及應用。具體是以負載鈀納米粒子的雙殼Cu₂O空心球Pd NPs@DSHSs?Cu₂O為信號放大平臺，以負載金納米粒子的氧化石墨烯摻雜的聚3，4乙二氧基噻吩納米棒Au NPs/PEDOT/GO為基底材料，制備了一種夾心型電化學免疫傳感器并實現了對神經元特異性烯醇化酶的定量檢測。

技術領域

本發明屬于免疫分析和生物傳感技術領域，提供了一種檢測神經元特異性烯醇化酶免疫傳感器的制備及應用。

背景技術

神經元特異性烯醇化酶是烯醇化酶的糖酵解神經特異性同工酶，可提供小細胞肺癌和神經母細胞瘤的病程和治療結果等信息。臨床診斷發現，當人血清中的神經元特異性烯醇化酶濃度大于100 ng/mL 時，小細胞肺癌發生的幾率很大。此外，已有報道稱神經元特異性烯醇化酶也可作為預測腦梗死，創傷性腦損傷和克雅氏病的生物標志物。因此，實現神經元特異性烯醇化酶的定量準確檢測對早期臨床診斷很有必要。

到目前為止，檢測神經元特異性烯醇化酶的分析方法多種多樣，如電化學發光酶免疫法，熒光免疫分析法，電化學適配傳感器等。值的得注意的是，電化學免疫分析法是將免疫分析與電化學分析相結合的產物。因其相當大的靈敏度、可接受的特異性、操作便捷、成本低等優點而被認為是最有潛力的分析方法。其中，基于抗原和抗體特異性識別的夾心型電化學免疫傳感器具有選擇性好，背景噪聲低的優點，已被用于抗體的定量檢測。

本發明采用負載鈀納米粒子的雙殼Cu₂O空心球Pd NPs@DSHSs-Cu₂O作為信號放大策略，具有高比表面積的雙殼空心結構提供了豐富的催化活性位點，基于DSHSs-Cu₂O與PdNPs的協同作用實現了對H₂O₂的有效還原，放大了電流信號。更重要的是，通過Pd-N鍵可以增加與第二抗體Ab₂的偶聯。采用負載金納米粒子的氧化石墨烯摻雜的聚3，4乙二氧基噻吩納米棒Au NPs/PEDOT/GO作為基底材料。納米棒狀結構提供了較高的比表面積，促進了界面電子傳遞，表面暴露的羧基和負載的小尺寸金納米粒子有效增加了第一抗體Ab₁的結合位點，提高了免疫傳感器的靈敏度。測試結果表明，構建的免疫傳感器具有良好的特異性，穩定性和重現性。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種檢測神經元特異性烯醇化酶的夾心型電化學免疫傳感器的制備方法。

本發明的目的之二是將制備的夾心型電化學免疫傳感器用于神經元特異性烯醇化酶的定量檢測。

本發明的技術方案，包括以下步驟：

(1)負載鈀納米粒子的雙殼Cu₂O空心球標記的神經元特異性烯醇化酶第二抗體PdNPs@DSHSs-Cu₂O/Ab₂的制備；

(2)負載金納米粒子的氧化石墨烯摻雜的聚3，4乙二氧基噻吩納米棒Au NPs/PEDOT/GO的制備；

(3)夾心型電化學免疫傳感器的制備；

(4)通過時間-電流法對神經元特異性烯醇化酶進行檢測。

其中步驟(1)負載鈀納米粒子的雙殼Cu₂O空心球標記的神經元特異性烯醇化酶第二抗體Pd NPs@DSHSs-Cu₂O/Ab₂的制備包括：

①DSHSs-Cu₂O的制備