[發明專利]一種包硅磁性微球的制備方法

有效

• 申請號: 202011463973.0
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112574984B
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 張光亞;劉欣;葛慧華
• 申請（專利權）人: 華僑大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N9/24;C07K19/00;B01J13/02
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

本發明公開了一種包硅磁性微球的制備方法，包括如下步驟：(1)將磁性微球均勻分散于無水乙醇中，接著通過磁鐵富集磁性微球，棄去無水乙醇，再超聲分散于體積濃度為18?22％的乙醇溶液中；(2)室溫下將純化后的重組蛋白溶液與步驟(1)所得的物料充分混合0.5?3min，接著加入硅前體溶液于室溫下繼續混合3?10min，然后靜置5?10min，即得所述包硅磁性微球。本發明整個過程耗時20?90min，固定化酶產量可達99％，簡潔、高效，且條件溫和，制備過程綠色環保，有廣闊的工業實際應用前景。

技術領域

本發明屬于磁性微球制備技術領域，具體涉及一種包硅磁性微球的制備方法。

背景技術

由于磁性納米粒子(magnetic?nanoparticles，MNPs)的磁響應性可以很好的解決酶的實際應用中分離純化的問題，已被越來越的廣泛地用于酶的固定化。但是將作為磁性納米粒子核心的磁性微球(最常用的是磁鐵礦(Fe₃O₄)和磁赤鐵礦(γ-Fe₂O₃))直接用于固定化酶比較困難，而且容易聚集和氧化。二氧化硅是最常用來修飾磁性納米粒子的材料，但是現在普遍方法是利用化學法在磁性微球表面生成二氧化硅，再進一步修飾來實現酶的固定化。這樣的操作不僅耗時長，而且需要大量有機溶劑。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術缺陷，提供一種包硅磁性微球的制備方法。

本發明的技術方案如下：

一種包硅磁性微球的制備方法，包括如下步驟：

(1)將磁性微球均勻分散于無水乙醇中，接著通過磁鐵富集磁性微球，棄去無水乙醇，再超聲分散于體積濃度為18-22％的乙醇溶液中；

(2)室溫下將純化后的重組蛋白溶液與步驟(1)所得的物料充分混合0.5-3min，接著加入硅前體溶液于室溫下繼續混合3-10min，然后靜置5-10min，即得所述包硅磁性微球；

該重組蛋白由如SEQ?ID?NO.01所示的木聚糖酶和如SEQ?ID?NO.02所示的類彈性蛋白多肽相連而成；重組蛋白溶液的濃度為150-250μmol/L，硅前體溶液的濃度為0.9-1.1mol/L，重組蛋白溶液與硅前體溶液的體積比為4-9∶1-6，且硅前體在步驟(2)的物料中的終濃度為0.09-0.11mol/L。

在本發明的一個優選實施方案中，所述木聚糖酶的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.03所示。

在本發明的一個優選實施方案中，所述類彈性蛋白多肽的核苷酸序列如SEQ?IDNO.04所示。

在本發明的一個優選實施方案中，所述木聚糖酶和所述類彈性蛋白多肽相連通過一連接肽相連。

進一步優選的，所述連接肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.05所示。

更進一步優選的，所述連接肽的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.06所示。

在本發明的一個優選實施方案中，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.07所示。

進一步優選的，所述重組蛋白的核苷酸序列序列如SEQ?ID?NO.08所示。

在本發明的一個優選實施方案中，所述硅前體為四甲氧基硅烷和/或正硅酸乙酯。

在本發明的一個優選實施方案中，所述步驟(1)中的磁性微球、無水乙醇和乙醇溶液的比例為1-7g∶40-300mL∶0.1-0.8mL。

本發明的有益效果是：本發明整個過程耗時20-90min，固定化酶產量可達99％，簡潔、高效，且條件溫和，制備過程綠色環保，有廣闊的工業實際應用前景。

附圖說明