[發明專利]一種用于檢測β淀粉樣蛋白的基因序列組、雜交瘤細胞組及膠乳增強免疫比濁法試劑盒

在審

• 申請號: 202011463655.4
• 申請日: 2020-12-08
• 公開（公告）號: CN112608926A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 芮雙印;符修樂
• 申請（專利權）人: 安徽大千生物工程有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/546;G01N33/543;C12R1/91
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 王偉

1.一種用于檢測β淀粉樣蛋白的基因序列組，其特征在于：包括基因片段一、基因片段二和基因片段三，所述基因片段一的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述基因片段二的DNA序列如SEQ ID NO.2所示，所述基因片段三的DNA序列如SEQ ID NO.3所示。

2.一種用于檢測β淀粉樣蛋白的雜交瘤細胞組，其特征在于：包括雜交瘤細胞一、雜交瘤細胞二和雜交瘤細胞三，所述雜交瘤細胞一由經基因片段一的表達產物免疫的細胞和骨髓瘤細胞融合而成，所述雜交瘤細胞二由經基因片段二的表達產物免疫的細胞和骨髓瘤細胞融合而成，所述雜交瘤細胞三由經基因片段三的表達產物免疫的細胞和骨髓瘤細胞融合而成。

3.一種β淀粉樣蛋白的膠乳增強免疫比濁法試劑盒，其特征在于：包括試劑R1和試劑R2；

所述試劑R1包括如下組分：

所述試劑R2包括如下組分：

所述Aβ-latexMIX由三株單克隆抗體Aβ1-mab、Aβ2-mab、Aβ3-mab分別交聯至聚苯乙烯膠乳微球后混合而成。

4.如權利要求3所述的β淀粉樣蛋白的膠乳增強免疫比濁法試劑盒，其特征在于：所述三株單克隆抗體Aβ1-mab、Aβ2-mab、Aβ3-mab分別選用如權利要求2所述的雜交瘤細胞一、所述的雜交瘤細胞二和所述的雜交瘤細胞三分泌的抗體。

5.如權利要求3或4所述的β淀粉樣蛋白的膠乳增強免疫比濁法試劑盒，其特征在于：所述Aβ-latexMIX的制備方法如下：

5.1用活化緩沖液懸浮聚苯乙烯膠乳微球，得到微球活化液；

5.2向微球活化液中加入EDC，室溫孵育，然后再次加入EDC，繼續室溫孵育，得到微球孵育液；

5.3用包被緩沖液清洗微球孵育液，然后將得到的聚苯乙烯膠乳微球懸浮在包被緩沖液中，得到微球懸浮；

5.4用包被緩沖液溶解Aβ1-mab，得到Aβ1-mab抗體溶液；

5.5將Aβ1-mab抗體溶液加入微球懸液中，持續攪拌室溫孵育，得到反應溶液；

5.6向反應溶液中加入乙醇胺，持續攪拌室溫孵育，得到交聯混合液；

5.7用儲存緩沖液懸浮交聯混合液，移除未結合的抗體和乙醇胺，獲得Aβ1-mab的膠乳微球Aβ1-latex；

5.8按照上述操作，獲得Aβ2-mab、Aβ3-mab的膠乳微球Aβ2-latex、Aβ3-latex；

5.9將Aβ1-latex、Aβ2-latex、Aβ3-latex按2：2：3混合，獲得Aβ-latexMIX。

6.如權利要求3或4所述的β淀粉樣蛋白的膠乳增強免疫比濁法試劑盒，其特征在于：還包括試劑校準品，所述試劑校準品包括如下組分：

其中，rAβ1-3為三種目的蛋白rAβ1、rAβ2和rAβ3按1:1:1混合的混合物。

7.如權利要求3至6中任一項所述的β淀粉樣蛋白的膠乳增強免疫比濁法試劑盒的測定方法，其特征在于：分析方法采用兩點終點法，條件如下：

反應方向:上升反應；

校準方式:Logit-Log(5P)；

測定波長:570nm；

測定溫度:37℃；

樣本:試劑R1:試劑R2＝20:210:70(μL)

測試步驟：吸取20μL樣本，加入210μL試劑R1，37℃孵育5min，加入70μL試劑R2，1min后讀取吸光值A1，3min后讀取吸光值A2，計算ΔA。