[發(fā)明專利]一種利用經(jīng)修飾化的離子液體萃取果蔬中劣變蛋白酶的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011462780.3
• 申請(qǐng)日: 2020-12-14
• 公開（公告）號(hào): CN114621943A
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 翟晨;王濤;王書雅;錢承敬;謝云峰;李夢(mèng)瑤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中糧營養(yǎng)健康研究院有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/50
• 分類號(hào): C12N9/50
• 代理公司: 北京信慧永光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11290
• 代理人: 孫雪;張淑珍

本發(fā)明涉及一種利用經(jīng)修飾化的離子液體萃取果蔬中劣變蛋白酶的方法以及通過該方法獲得的劣變蛋白酶。利用該方法萃取，萃取條件溫和、萃取時(shí)間短且所得到的酶活性較高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用經(jīng)修飾化的離子液體萃取果蔬中劣變蛋白酶的方法、以及通過這種方法制備的劣變蛋白酶。

背景技術(shù)

我國是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國，每年的果蔬產(chǎn)量都遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其它國家，是我國大部分人民重要的經(jīng)濟(jì)來源，但與此同時(shí)高產(chǎn)量的背后也存在著高風(fēng)險(xiǎn)，果蔬的保存時(shí)間一般都比較短或者保存條件苛刻，很容易產(chǎn)生腐敗變質(zhì)。而果蔬的腐爛在很大程度上是酶促反應(yīng)的結(jié)果，與酶活性變化密切相關(guān)。

目前，番茄等植物性農(nóng)產(chǎn)品劣變蛋白酶的萃取多依賴于傳統(tǒng)的緩沖溶液法，利用緩沖溶液法提取出來的酶活性一般較低，而且提取時(shí)間較長，一般需要40min，耗時(shí)較長。

因此，現(xiàn)有技術(shù)亟需一種萃取條件溫和、萃取時(shí)間短且所得到的酶活性較高的劣變蛋白酶萃取方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有緩沖溶液萃取酶的方案以及現(xiàn)有的其它方案存在的萃取時(shí)間長、萃取所得酶活不高的問題，本發(fā)明人經(jīng)過潛心研究發(fā)現(xiàn)，離子液體能萃取劣變蛋白酶，是由于離子液體具有較強(qiáng)的溶劑作用，且與蛋白質(zhì)有多種分子作用力，尤其是氫鍵作用力、極性作用力和離子電荷作用力均會(huì)極大提高超氧化物歧化酶在離子液體水溶液中的溶解度；而修飾化的離子液體比普通離子液體更容易與劣變蛋白酶類形成氫鍵，而氫鍵作用力是離子液體與蛋白質(zhì)的多種作用力之一。利用經(jīng)修飾化的離子液體萃劣變蛋白酶的條件溫和、萃取的酶活較高且時(shí)間更短。而利用經(jīng)修飾化的離子液體對(duì)劣變蛋白酶進(jìn)行萃取的研究幾乎沒有。

因此，本發(fā)明提供了一種利用經(jīng)修飾化的離子液體萃取果蔬中劣變蛋白酶的方法。利用該方法萃取，萃取條件溫和、萃取時(shí)間短且所得到的酶活性較高。

具體而言，第一方面，本發(fā)明提供了一種利用經(jīng)修飾化的離子液體萃取果蔬中的劣變蛋白酶的方法，所述方法包括以下步驟：

a.原料預(yù)處理；

b.加入經(jīng)修飾化的離子液體與任選的輔助劑以及水構(gòu)造雙相萃取體系的萃取劑進(jìn)行萃取；

c.分離萃取液；以及

d.酶活檢測(cè)比較。

第二方面，本發(fā)明提供了通過如上所述的方法制備的劣變蛋白酶。

有益效果

本發(fā)明提出了利用經(jīng)修飾化的離子液體萃取果蔬中劣變蛋白酶的方法。離子液體能萃取劣變蛋白酶，是由于離子液體具有較強(qiáng)的溶劑作用，且與蛋白質(zhì)有多種分子作用力，尤其是氫鍵作用力，極性作用力，離子電荷作用力，均會(huì)極大提高超氧化物歧化酶在離子液體水溶液中的溶解度。經(jīng)修飾化的離子液體比普通離子液體更容易與劣變蛋白酶類形成氫鍵，而氫鍵作用力是離子液體與蛋白質(zhì)的多種作用力之一。利用經(jīng)修飾化的離子液體萃劣變蛋白酶的條件溫和、萃取的酶活較高且時(shí)間更短。

酶活可以表征番茄的劣變情況，酶活性的高低與果蔬的貨架期以及劣變程度有很大的關(guān)系，在生產(chǎn)運(yùn)輸加工過程中番茄會(huì)發(fā)生不同程度的劣變，采用本發(fā)明的方法可以起到快速檢測(cè)番茄劣變程度的作用，以便其用于后期果蔬劣變的研究。

附圖說明

圖1是兩種離子液體體系提取蛋白質(zhì)過程及原理示意圖，其中“IL”表示離子液體。

圖2是使用[(H₂NC₂)Mim]Br進(jìn)行萃取時(shí)，[(H₂NC₂)Mim]Br用量與K₂HPO₄加入量交互作用的響應(yīng)圖。