[發明專利]一種預防黃顙魚“裂頭病”浸泡疫苗株的構建和應用

有效

• 申請號: 202011462761.0
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112481185B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 謝海俠;劉瑩莉;賀甜甜;聶品;韓冬
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 陳秋夢

本發明公開了一種預防黃顙魚“裂頭病”浸泡疫苗株的構建和應用，涉及微生物病原學與水產養殖病害防治交叉領域。通過敲除介導粘附/侵襲的I型菌毛fimA基因的負調控區獲得高侵襲力菌株，同時敲除介導在宿主細胞內繁殖的鮰愛德華氏菌Ⅲ型分泌系統eseJ基因，獲得一株高侵襲力、低繁殖力缺失突變菌株。該高侵襲力弱毒力鮰愛德華氏菌可作為弱毒疫苗株。本發明提供的高侵襲力弱毒疫苗可采用浸泡的方式對易感宿主進行免疫接種，疫苗接種操作簡單，成本低廉。

技術領域

本發明涉及微生物病原學與水產養殖病害免疫防治交叉領域，具體而言，涉及一種預防黃顙魚“裂頭病”浸泡疫苗株的構建和應用。

背景技術

鮰愛德華氏菌(Edwardsiella ictaluri)是一種革蘭氏陰性胞內菌，是引起鮰腸道敗血癥的病原(劉堂水等，2006；梁萬文等，2007；鄧顯文等，2008)。鮰愛德華氏菌主要感染鲇形目魚類，是斑點叉尾鮰養殖中的最重要的細菌性病原(Russo et al.,2009)。我國重要鲇形目養殖魚類，黃顙魚暴發病“裂頭病”亦由鮰愛德華氏菌的感染引起(葉仕根，2008；Liu et al.,2010)。其它重要鲇形目魚類，如南方大口鯰(Silurus meridionalis)、長吻鮠(Leiocassis longirostris)等也受這種病原的侵害。鮰愛德華氏菌的感染途徑有兩種，一種為經腸道上皮進入血液，病原菌隨血液循環到達全身內臟器官，引起敗血癥的急性感染；另一種為病原菌經鼻腔侵入嗅球，經由嗅神經感染腦組織，病灶向上發展導致頭部皮膚潰爛頂骨漏出，引起“裂頭病”的慢性感染。

鮰愛德華氏菌通過菌體表面鞭毛、菌毛等附屬結構運動并粘附至宿主細胞表面，經體表及腸上皮細胞入侵機體后會在宿主細胞內大量繁殖、擴散。由于鮰愛德華氏菌是一種胞內菌且感染腦組織，一般藥物很難突破魚體自身的血腦屏障到達病灶，相較于其他病原菌治療困難。鮰愛德華氏菌的注冊和在售的疫苗僅為由美國農業部農業研究服務署(USDA-ARS)水生動物健康研究中心采用傳統的化學致弱的方法開發的弱毒活疫苗(AQUAVAC-ESC)，主要針對斑點叉尾鮰的防病養殖。我國尚無針對黃顙魚“裂頭病”的鮰愛德華氏菌疫苗。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種預防黃顙魚“裂頭病”浸泡疫苗株的構建和應用以解決上述技術問題。

本發明是這樣實現的：

一種高侵襲力弱毒力鮰愛德華氏菌，其保藏編號為CCTCC NO：M 2020561。保藏地址為中國.武漢.武漢大學，保藏單位為中國典型培養物保藏中心，保藏時間為2020年9月29日始，保藏30年，菌株名稱為鮰愛德華氏菌HSN-1ΔeseJΔfimA_-245--50,Edwardsiellaictaluri HSN-1ΔeseJΔfimA_-245--50。

在本發明應用較佳的實施方式中，上述高侵襲力弱毒力鮰愛德華氏菌為雙缺失突變株，雙缺失突變株同時缺失鮰愛德華氏菌Ⅰ型菌毛操縱子的負調控區和鮰愛德華氏菌毒力島Ⅲ型分泌系統的一個編碼基因；

優選地，雙缺失突變株的野生型菌株為鮰愛德華氏菌HSN-1，為中國科學院水生生物研究所李愛華研究員饋贈。

野生型菌株分離自武漢養殖場的患有“裂頭病”黃顙魚腦組織。

在本發明應用較佳的實施方式中，上述負調控區為鮰愛德華氏菌Ⅰ型菌毛操縱子的負調控區；

優選地，負調控區為鮰愛德華氏菌Ⅰ型菌毛操縱子中fimA基因的﹣245—﹣50bp區域。

在本發明應用較佳的實施方式中，上述鮰愛德華氏菌毒力島Ⅲ型分泌系統的一個編碼基因為毒力基因eseJ。