[發(fā)明專利]三維大孔冷凍凝膠支架及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011461859.4 | 申請日: | 2020-12-09 |
| 公開(公告)號: | CN112592446A | 公開(公告)日: | 2021-04-02 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 王春明;周慧群;張哲 | 申請(專利權(quán))人: | 澳門大學(xué) |
| 主分類號: | C08F299/00 | 分類號: | C08F299/00;C08J9/28;A61L27/20;A61L27/56;A61L27/52;A61L27/50;C12N5/00;C12N5/071;C08L55/00 |
| 代理公司: | 成都超凡明遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51258 | 代理人: | 王暉;曹桓 |
| 地址: | 中國澳門*** | 國省代碼: | 澳門;82 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 三維 冷凍 凝膠 支架 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種三維大孔冷凍凝膠支架的制備方法,其特征在于,其包括:
將甲基丙烯酰胺基多糖的水溶液在引發(fā)劑的存在下,進行冷凍交聯(lián)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維大孔冷凍凝膠支架的制備方法,其特征在于,所述甲基丙烯酰胺基多糖為甲基丙烯酰胺基白芨多糖,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維大孔冷凍凝膠支架的制備方法,其特征在于,所述引發(fā)劑包括四甲基乙二胺和過硫酸銨;
優(yōu)選地,所述四甲基乙二胺在反應(yīng)體系中的濃度為0.1wt%~0.4wt%,所述過硫酸銨在反應(yīng)體系中的濃度為0.0625wt%~0.25wt%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維大孔冷凍凝膠支架的制備方法,其特征在于,所述甲基丙烯酰胺基多糖的水溶液的濃度為5~100mg/mL,優(yōu)選20~40mg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維大孔冷凍凝膠支架的制備方法,其特征在于,冷凍交聯(lián)的溫度為-25℃~-10℃,優(yōu)選-20℃,冷凍交聯(lián)的時間為12~20h;
優(yōu)選地,將冷凍交聯(lián)后得到的產(chǎn)物在室溫下融化,以獲得所述三維大孔冷凍凝膠支架。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項所述的三維大孔冷凍凝膠支架的制備方法,其特征在于,所述甲基丙烯酰胺基多糖主要由以下步驟制備得到:
將氧化多糖與甲基丙烯酸2-氨基乙基酯酰胺反應(yīng),以得到甲基丙烯酰胺基多糖;其中,氧化多糖由多糖被TEMPO體系選擇性氧化得到;
優(yōu)選地,當所述多糖為白芨多糖時,所述白芨多糖由白芨經(jīng)過水提醇沉,Sevag法除去蛋白和凝膠色譜法純化得到。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的三維大孔冷凍凝膠支架的制備方法,其特征在于,將氧化多糖與甲基丙烯酸2-氨基乙基酯酰胺反應(yīng)包括:
將所述氧化多糖溶解于緩沖液中,再加入活化劑活化所述氧化多糖上的羧基后,然后加入甲基丙烯酸2-氨基乙基酯反應(yīng)12~48小時;
優(yōu)選地,所述氧化多糖在所述緩沖液中的濃度為1~5mg/mL;
優(yōu)選地,所述氧化多糖與所述甲基丙烯酸2-氨基乙基酯的質(zhì)量比為1:1~10;
優(yōu)選地,所述緩沖液為2-(N-嗎啉)乙磺酸的緩沖液,優(yōu)選地,所述緩沖液的pH為6~7,更優(yōu)選pH為6.5;
優(yōu)選地,所述活化劑包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基丁二酰亞胺,所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基丁二酰亞胺的摩爾比為1:1.5~2.5,更優(yōu)選1:2;
優(yōu)選地,酰胺反應(yīng)后,加入1~5倍體積的乙醇后在0~8℃的溫度下靜置沉淀,再進行固液分離。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的三維大孔冷凍凝膠支架的制備方法,其特征在于,多糖被TEMPO體系選擇性氧化包括:將多糖溶解在緩沖液中,依次加入亞氯酸鈉、2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基和次氯酸鈉,反應(yīng)12~48小時;再加入1~5倍體積的乙醇后在0~8℃的溫度下靜置沉淀,再進行固液分離;
優(yōu)選地,所述多糖在緩沖液中的濃度為1~4mg/mL,緩沖液的pH為5.0~7.0,反應(yīng)溫度為25~65℃;
優(yōu)選地,次氯酸鈉在反應(yīng)體系中的濃度為0~1mmol/g,多糖與亞氯酸鈉的質(zhì)量之比為1:0.6~6,多糖與2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基的質(zhì)量之比為1:1~10。
9.一種三維大孔冷凍凝膠支架,其特征在于,其由權(quán)利要求1~8任一項所述的制備方法制備得到。
10.如權(quán)利要求9所述的三維大孔冷凍凝膠支架在細胞培養(yǎng)、組織工程或制備藥物中的應(yīng)用。
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