[發(fā)明專利]一種熱休克蛋白單抗修飾納米金籠制備方法及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011460522.1
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN113577268A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳稚冰;吳亞軍;樸寄綱;賴建軍;雷蘭;錢嘉凝;劉鵬遠;夏錦丹
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江醫(yī)院
• 主分類號: A61K41/00
• 分類號: A61K41/00;A61K39/395;A61K47/68;A61K47/60;A61K47/69;A61P35/00;B22F9/24;B22F1/00;B82Y40/00;B82Y5/00
• 代理公司: 浙江英普律師事務(wù)所 33238
• 代理人: 王炎軍

1.一種熱休克蛋白單抗修飾納米金籠制備方法，其特征在于包括如下步驟：

步驟一、使用銀納米立方體(AgNC)模板和氯金酸(HAuCl4)通過電流取代反應(yīng)合成AuNC，使用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作為表面穩(wěn)定劑，形成PVP-AuNC；

步驟二、采用PEG修飾于金納米籠表面并取代PVP，獲得PEG-AuNC；

步驟三、通過酯化反應(yīng)將cmHSP 70蛋白修飾于PEG末端獲得cmHSP70-AuNC。

2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的熱休克蛋白單抗修飾納米金籠制備方法，其特征在于：所述的步驟一中銀納米立方體的制備方法采用多元醇輔助硫化還原法。

3.根據(jù)權(quán)利要求2中所述的熱休克蛋白單抗修飾納米金籠制備方法，其特征在于，所述的步驟一包括如下過程：首先，于50ml圓底燒瓶中加入10mL乙二醇，在磁力攪拌下油浴中加熱至150℃，并隨后添加0.12mL 3mM NaSH，5min后，加入1mL3 mM鹽酸溶液；之后攪拌5min，加入2.5mL濃度為20mg/mL聚乙烯基吡咯烷酮溶液(PVP，Mw＝55000)，攪拌3min后，加入0.8mL 282mM的CF3COOAg溶液；然后，將混合物的溫度保持在150℃下1小時，并且隨后在水浴中冷卻混合物以結(jié)束反應(yīng)；樣品以8000轉(zhuǎn)/分的速度離心10分鐘并洗滌兩次分別用丙酮和去離子水；最后，得到的銀納米立方體是分散在10mL去離子(DI)水中，以備進一步使用。

4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的熱休克蛋白單抗修飾納米金籠制備方法，其特征在于：所述的步驟一中，PVP-AuNC的制備方法包括如下過程，取分散在10mL去離子(DI)水中的銀納米立方體和90mL濃度為1.5mg/mL PVP溶液在磁攪拌下均勻混合，并加熱至100℃；然后，以0.2mL的速率逐滴向混合物中添加HAuCl₄溶液(0.6mM)；用紫外-可見光譜(UV-Vis)實時監(jiān)測反應(yīng)的LSPR峰的變化；當(dāng)特征峰達到800nm左右，停止加入并降溫終止反應(yīng)；以8000轉(zhuǎn)/分的速度離心10分鐘收集產(chǎn)物；將收集的產(chǎn)物洗滌三次次用去離子水，然后用飽和氯化鈉溶液除去副產(chǎn)品AgCl；最后，將所得PVP-AuNC分散于10毫升去離子水供進一步使用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的熱休克蛋白單抗修飾納米金籠制備方法，其特征在于：所述的步驟二中包括如下過程：采用1毫升制備的PVP-AuNC和在25℃下混合0.5mL 1mM的SH-PEG-SC后反應(yīng)12h；然后，以5000轉(zhuǎn)/分的速度離心10分鐘至分離未反應(yīng)的SH-PEG-SC，得到的PEG-AuNC為分散在去離子(DI)水中以備進一步使用。

6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的熱休克蛋白單抗修飾納米金籠制備方法，其特征在于：所述的步驟三中包括如下過程：將100μg制備的PEG-AuNC重新分散在混合物中PBS(pH＝7.4)和100μg cmHSP70溶液，在4℃下反應(yīng)12小時；離心樣品以去除未反應(yīng)的cmHSP70，并清洗收集的產(chǎn)物cmHSP-AuNC保存在PBS中。

7.將cmHSP70-AuNC結(jié)合光波熱療在無特異性標(biāo)志的腫瘤疾病治療中的用途。

8.根據(jù)權(quán)利要求7中所述的cmHSP70-AuNC結(jié)合光波熱療在無特異性標(biāo)志的腫瘤疾病治療中的用途，其特征在于：所述的腫瘤疾病包括乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌、皮膚癌。