[發明專利]一種甲醛脫氫酶突變體及其應用

在審

• 申請號: 202011460232.7
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN114621935A
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 趙宗保;王俊婷
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12P19/36;C12P7/46;C12P7/56
• 代理公司: 北京元周律知識產權代理有限公司 11540
• 代理人: 楊曉云

1.一種甲醛脫氫酶突變體，其特征在于，所述甲醛脫氫酶突變體選自以SEQ ID NO.1所示的野生型甲醛脫氫酶為基礎進行如下突變后的突變體中的任一種：

第192位的A突變為R；或

第236位的L突變為V；或

第223位的L突變為V；或

第223位的L突變為T；或

第218位的L突變為V；或

第267位的R突變為V；或

第192位的A突變為R、第236位的L突變為V；或

第192位的A突變為R、第236位的L突變為V、第223位的L突變為V；或

第192位的A突變為R、第236位的L突變為V、第223位的L突變為T；或

第192位的A突變為R、第236位的L突變為V、第218位的L突變為V、第267位的R突變為V；或

第236位的L突變為V、第223位的L突變為V；或

第218位的L突變為V、第223位的L突變為V。

2.一種核酸，其特征在于，所述核酸編碼如權利要求1所述的甲醛脫氫酶突變體中的任一種；

優選地，所述核酸選自以SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列為基礎進行如下突變后的突變體中的任一種：

第192個密碼子GCC突變為AGA；或

第236個密碼子CTG突變為GTG；或

第223個密碼子CTG突變為GTT；或

第223個密碼子CTG突變為ACG；或

第218個密碼子CTC突變為GTT；或

第267個密碼子CGC突變為GTT；或

第192個密碼子GCC突變為AGA、第236個密碼子CTG突變為GTG；或

第192個密碼子GCC突變為AGA、第236個密碼子CTG突變為GTG、第223個密碼子CTG突變為GTT；或

第192個密碼子GCC突變為AGA、第236個密碼子CTG突變為GTG、第223個密碼子CTG突變為ACG；或

第192個密碼子GCC突變為AGA、第236個密碼子CTG突變為GTG、第218個密碼子CTC突變為GTT、第267個密碼子CGC突變為GTT；或

第236個密碼子CTG突變為GTG、第223個密碼子CTG突變為GTT；或

第218個密碼子CTC突變為GTT、第223個密碼子CTG突變為GTT。

3.一種載體，其特征在于，所述載體包含含有權利要求1任一項所述的核酸的表達盒；

優選地，一種宿主，其特征在于，所述宿主的細胞內包含權利要求3所述的載體；

優選地，所述宿主包括原核微生生物和/或真核微生生物；

優選地，所述原核微生物包括大腸桿菌和/或乳酸乳球菌；

所述真核微生物包括釀酒酵母、里氏木霉或圓紅冬胞酵母中至少一種；

優選地，所述宿主的細胞內表達有NTT4核苷酸轉運蛋白和/或AtNDT2核苷酸轉運蛋白；

優選地，所述宿主的細胞內表達有釀酒酵母醇脫氫酶、羥基丁酮脫氫酶、蘋果酸脫氫酶突變體MDH-L6R中的至少一種。

4.根據權利要求3所述的宿主，其特征在于，所述宿主的細胞內表達有蘋果酸酶突變體ME-L310R/Q401C。

5.根據權利要求3所述的宿主，其特征在于，所述宿主的細胞內表達有乳酸脫氫酶突變體DLDH-V152R、乳酸脫氫酶突變體V152R/I177R/A212G、乳酸脫氫酶突變體V152R/I177S/A212D、乳酸脫氫酶突變體V152R/N213E或乳酸脫氫酶突變體V152R/I77K/N213I中至少一種。

6.根據權利要求1所述的甲醛脫氫酶突變體、權利要求2所述的核酸、權利要求2所述的載體、權利要求2～5任一項所述的宿主在利用甲醛類化合物還原NAD類似物反應中的應用；

優選地，所述NAD類似物選自具有式I～III任一所示的結構式的物質中的任一種；

優選地，所述甲醛類化合物包括甲醛和/或氘代甲醛。