[發(fā)明專利]一種CSFV的IPMA中和抗體檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011459150.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112611866A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鵬;王利平;劉興友;王選年;劉長(zhǎng)忠;魏小兵;孫國(guó)鵬;岳鋒;李紅;張艷芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

1.一種CSFV的IPMA中和抗體檢測(cè)方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)鋪板：把PK15細(xì)胞消化離心后制備成含1.0×10⁵cells/mL的細(xì)胞懸液，每孔100μL鋪到96孔板上，置于37℃5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h；待細(xì)胞完全貼壁，將等體積的CSFV病毒和臨床血清37℃孵育1h，接種到96孔板內(nèi)的PK15細(xì)胞上；同時(shí)設(shè)立正常接毒細(xì)胞對(duì)照孔；

(2)固定：培養(yǎng)48h待細(xì)胞長(zhǎng)滿后取出96孔板，用預(yù)冷的無(wú)水乙醇固定；

(3)加一抗：把96孔板用PBS洗2-3次，加入100μL用0.01MPBS 1:400稀釋的CSFV陽(yáng)性血清，置于37℃中作用1h；

(4)加二抗：加入100μL用0.01M PBS(pH7.4)稀釋1000倍羊抗豬IgG-HRP二抗，37℃作用1h；

(5)顯色：DAB顯色5min，終止反應(yīng)，置光學(xué)顯微鏡下觀察顯色結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CSFV的IPMA中和抗體檢測(cè)方法，其特征在于，所述CSFV病毒液的制備方法如下：將臨床采集的病料組織進(jìn)行研磨，按照1mg組織樣品加入1mL PBS溶解，反復(fù)凍融3次，取上清；12000rpm離心5min，用0.22μm濾器過(guò)濾，獲得CSFV病毒液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CSFV的IPMA中和抗體檢測(cè)方法，其特征在于，所述臨床血清的制備方法如下：將采集的血液進(jìn)行離心，收集血清，用于后期臨床血清檢測(cè)。