[發明專利]檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病風險的SNP位點的專用引物及應用

有效

• 申請號: 202011458525.1
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112391463B
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發明（設計）人: 孫于謙
• 申請（專利權）人: 北京大學人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京邦申誠知識產權代理事務所(普通合伙) 11871
• 代理人: 簡德明

本發明屬于生物技術領域，提供了一種用于檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病風險的SNP位點的專用引物，包括引物組1和引物組2，其中引物組1為3對引物組成的特異性PCR引物，引物組2為3條引物組成的單堿基延伸引物。本發明還提供了用于檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病風險的SNP位點的制劑，以及用于檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病風險的SNP位點信息方法。采用本發明提供的專用引物，通過一次檢測即可高效的同時完成與異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病發病風險相關的3個SNP位點的基因多態性與異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病的發生風險的關聯性，大大減少了檢測時間，節約了成本。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種用于檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病風險的SNP位點的專用引物及應用。

背景技術

侵襲性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)是異基因造血干細胞移植(allogeneic stem transplantation,HSCT)后常見的重要并發癥，具有以下特點：發生率高：在同胞相合移植術后發生率約5-10％，在配型不合/單倍型造血干細胞移植術后甚至可高到20％；預后差：患者死亡率高達30-90％，研究顯示，合并侵襲性曲霉病與未合并侵襲性曲霉病患者的長期生存率分別為24.4％和71.2％；3.治療時間長，治療費用高。

鑒于以上特點，IA的預防在HSCT臨床實踐中非常重要。目前臨床實踐中的預防策略還較為粗略，未能依據個人發生IA的風險高低進行分層預防：在發生IA風險高(高危)患者中可能存在預防不足的問題，而在低?；颊咧锌赡艽嬖陬A防過度的問題；此外，真菌藥物預防使用療程較長，費用昂貴、存在臟器毒性，帶來沉重的經濟負擔和臟器風險。因此，根據患者IA風險進行相應的分層預防是HSCT領域的重要研究課題。而進行合理的分層預防的前提是能夠精準預測IA高危人群。

眾所周知，基因位點的多態性(主要形式是SNP)可能會引起DNA結構和基因功能的改變，是導致不同個體間生物學性狀差異的遺傳學基礎。如SNP位點的多態性導致不同個體對復雜疾病的易感性、對不同藥物的治療敏感性不同。因此，通過個體基因單核苷酸多態性的檢測，可以做到疾病的早發現，早預警；對患病個體，幫助醫生篩選出有效的治療方案，對患者做出最正確的治療決策，既節省了患者無效的醫療費用，而且提高了治療效果。

但是，檢測患者SNP位點的基因型的傳統方法主要是sanger測序，熒光定量PCR等方法。以上方法雖然也可能在臨床上提供較好的價值，但是存在費時、經濟成本高、時間成本高等問題，未能在臨床上大規模推廣使用。

根據最新的研究成果，基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)技術(MASSARRAY平臺)可同時檢測多個基因多態性位點，具有兼容性強、通量高、精準度高、性價比高的優點，可一次完成以上三個位點的檢測。但是目前未見到將MALDI-TOF-MS用于檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病的發生風險的關聯性的報導。

發明內容

為了解決現有技術中存在的上述問題，本發明提供了一種用于檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病風險的SNP位點的專用引物、制劑、檢測方法，以及該引物組、試劑盒、檢測方法在制備檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病風險的產品中的應用；該專用引物可以精準預測哪些患者屬于異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病高危人群。

第一方面，本發明提供了一種用于檢測異基因造血干細胞移植后侵襲性曲霉病風險的SNP位點的專用引物，包括引物組1和引物組2，其中：

所述引物組1為特異性PCR引物，包括引物對1、引物對2、引物對3；

所述引物對1由序列1所示的單鏈DNA分子和序列2所示的單鏈DNA分子組成；

所述引物對2由序列3所示的單鏈DNA分子和序列4所示的單鏈DNA分子組成；