[發明專利]異養轉自養兩步法培養卵囊藻的方法

有效

• 申請號: 202011457614.4
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112553081B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發明（設計）人: 唐賓國;謝敏;文燦;王繼巖
• 申請（專利權）人: 武漢市中易天地物聯科技有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C02F3/32;C12R1/89;C02F103/20
• 代理公司: 武漢經世知識產權代理事務所(普通合伙) 42254
• 代理人: 邱雨家

1.異養轉自養兩步法培養卵囊藻的方法，其特征在于：包括以下步驟

S1，異養培養，將卵囊藻種子液接種發酵罐中，以銨鹽為氮源，以乙酸鈉、果糖、蔗糖、葡萄糖為碳源，碳氮比為10:1-50：1，培養過程中監控發酵罐pH，用氨水進行調節，使發酵罐內pH維持在7.5±0.2的范圍，發酵生物量達到35000-50000mg/L時結束發酵；

S2，自養培養，將S1得到的卵囊藻藻液作為種子液接種于光反應器中，培養基選用卵囊藻專用培養基，按1‰-3‰接種量接種，培養用水經過次氯酸鈉消毒，光照培養，使用光照為3000lux-6000lux，培養至生物量達到400-500mg/L時裝罐。

2.根據權利要求1所述的異養轉自養兩步法培養卵囊藻的方法，其特征在于：卵囊藻專用培養基包括A液和B液，A液配方包括NaNO₃ 50-180g/L，CH₄N₂O 20-50g/L，NaH₂PO₄·2H₂O2-6 g/L，EDTA二鈉3-5g/L；FeCl₃·6H₂O 2-3g/L；C₆H₈O₇5-40g/L；B液配方包括，C₆H₈FeNO₇ 3-8g/L，CaCl₂.2H₂O20-50g/L，H₃BO₃2-3g/L，MnCl₂·4H₂O 0.5-3g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.2-0.6g/L，Na₂MoO₄.2H₂O 0.3-0.8g/L，CuSO₄.5H₂O 0.5-0.8g/L，Co(NO₃)₂.6H₂O 0.3-0.6g/L，維生素B10.1-0.3g/L，維生素B12 0.005-0.001g/L，生物素0.003-0.005g/L。

3.根據權利要求1所述的異養轉自養兩步法培養卵囊藻的方法，其特征在于：S1中，發酵生物量達到40000mg/L時結束發酵。

4.根據權利要求1所述的異養轉自養兩步法培養卵囊藻的方法，其特征在于，S2中，培養至生物量達到400mg/L時裝罐。

5.根據權利要求1所述的異養轉自養兩步法培養卵囊藻的方法，其特征在于：S1中，卵囊藻種子液制備方法如下，步驟(1)為將卵囊藻藻種接種平板上，培養溫度25-35℃，培養10天，形成藻落；步驟(2)挑取藻落于20-50mL培養基中震蕩培養，培養溫度為25-35℃，轉速為50-150rpm/min，培養4-6天獲得一級種子液；步驟(3)將一級種子液轉接于300mL培養基中，培養溫度為25-35℃，轉速為50-150rpm/min，震蕩培養，培養4-6天獲得二級種子液；步驟(4)將二級種子液轉接于3L培養基中，培養溫度為25℃，轉速為50-150rpm/min，震蕩培養，培養4-6天的種子液作為發酵罐培養藻種。

6.根據權利要求5所述的異養轉自養兩步法培養卵囊藻的方法，其特征在于：S1中，卵囊藻種子液接種量為2.5-20％。

7.根據權利要求6所述的異養轉自養兩步法培養卵囊藻的方法，其特征在于：S1中，卵囊藻種子液接種量為10％。