[發明專利]一種檢測多種抗原的病理檢測試劑盒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011455212.0
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112834736A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 潘麗;李明振;蔡寧
• 申請（專利權）人: 杭州百凌生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532
• 代理公司: 杭州信義達專利代理事務所(普通合伙) 33305
• 代理人: 萬景旺

本發明一種同時檢測N種抗原的試劑盒，屬于生物學檢測技術領域及免疫學領域，所述試劑盒包括：能夠特異性結合所述N種抗原的N種第一抗體組成的第一抗體組合物；抗所述N種第一抗體的N種第二抗體組成的第二抗體組合物，所述N種第二抗體分別與N種人工多肽偶聯；分別抗所述N種人工多肽的N種第三抗體或其抗原結合部分組成的第三抗體組合物或抗原結合部分組合物，所述第三抗體或其抗原結合部分分別與多聚物偶聯，與N種第三抗體偶聯的多聚物上偶聯N種顯色劑。利用不同的顯色劑，能夠用于N種抗原的同時檢測，特異性好，靈敏度高，應用前景廣闊。

技術領域

本發明屬于生物學檢測技術領域及免疫學領域，具體地，一種同時檢測多種抗原的病理檢測試劑盒及其制備方法和應用。

背景技術

免疫組織化學(immunohistochemistry，IHC)是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對病理組織中相應抗原進行定性、定位或定量測定的一項免疫學檢測技術。免疫組織化學檢測原理是：組織切片經抗原熱修復處理后與一抗試劑進行孵育，在原位形成一抗與目標抗原的抗原-抗體復合物；抗原-抗體復合物中一抗分子再與酶標記的聚合物二抗通過孵育結合，在原位進一步形成抗原-抗體-二抗聚合物的復合物；最后通過酶催化的底物在抗原部位形成有顏色的沉積物。光學顯微鏡下通過觀察棕色部位來確定是否有目標抗原及其表達情況。通過免疫組織化學染色可確定病理組織細胞類型和形態、辨認組織細胞產物的來源、確定組織細胞的分化程度；尤其在臨床病理中的應用最為重要，如鑒定病變性質，發現微小病灶，探討腫瘤起源或分化表型，確定腫瘤分期，指導治療和預后；輔助疾病診斷和分類，尋找感染病因等。

目前國內市場上供應“抗體-酶標記-多聚物檢測系統”二抗產品的公司主要有：(1)Dako公司的Envision二抗，使用鏈狀的葡聚糖為多聚物載體，在載體上連接多個酶分子與二抗分子，使檢測信號放大，但是鏈狀的葡聚糖分子量較大，整個酶-抗體聚合物與組織蛋白結合時產生較大的空間位阻，對于低豐度表達的蛋白檢測靈敏度不高；(2)CN105566499A公開了的病理增強型二抗原理是使用葡萄串式多聚物為載體制備的酶標二抗，使多個酶緊密地連接到球狀多分支載體體分子上，屬于一步法二抗的制備。(3)德國SDTGmbH,Baesweiler發明的AmpliStain^TMdetection systems使用蛇形鏈接物作物骨架制備酶-載體-二抗復合物。(4)羅氏診斷試劑公司開發的二抗，是以天然存在的小分子半抗原(如農藥、獸藥、抗生素、量子點等)與抗體偶聯，以天然存在的小分子半抗原與對應酶多聚物抗小分子半抗原抗體結合，從而實現組織蛋白的免疫組化檢測；但該方法需要天然半抗原小分子，交聯過程需要較多有毒有害化學試劑，且偶聯過程復雜，故生產費用較高。

目前，現有技術在聚合物結構設計、制備工藝上沒有大的改進，具體體現在：單位體積內酶、抗體數量沒有顯著增加；聚合物空間位阻沒有明顯降低，導致靈敏度沒有改善，故急需效果更好的病理檢測增強型二抗。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

本發明的第一方面提供一種人工多肽組合物，其包括人工多肽PL、人工多肽HM和人工多肽LH中的至少一種，其中，

所述人工多肽PL的氨基酸序列包括AAP(AADAAD)nAAPAAA，其中n＝1～10，即具有SEQ ID NO.1-10所示氨基酸序列。在本發明的一些實施方案中，為了方便偶聯蛋白，在該氨基酸的N端或C端添加1個半胱氨酸(C)。

所述人工多肽HM的氨基酸序列包括GQA(T)nAQQ，其中n＝1～10，即具有SEQ IDNO.11-20所示氨基酸序列序列。在本發明的一些實施方案中，為了方便偶聯蛋白，在該氨基酸的N端或C端添加1個半胱氨酸(C)。

所述人工多肽LH的氨基酸序列包括TTT(PTT)n，其中n＝1～10，即具有SEQ IDNO.21-30所示氨基酸序列序列。在本發明的一些實施方案中，為了方便偶聯蛋白，在該氨基酸的N端或C端添加1個半胱氨酸(C)。