[發明專利]一種誘導寡孢節叢孢產生捕食器官的方法

有效

• 申請號: 202011454864.2
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112574939B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 王芯;徐婭;張克勤;李國紅
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12N1/38;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 成都東恒知盛知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51304
• 代理人: 何健雄;廖祥文

本發明屬于生物化學技術領域，具體涉及一種誘導寡孢節叢孢產生捕食器官的方法。所述方法包括以下步驟：寡孢節叢孢孢子的制備；將制備得到的孢子加入WA培養及中，20?30℃培養36?48h，加入丁基?beta?d?吡喃葡萄糖苷，20?30℃繼續培養。采用本發明方法可使寡孢節叢孢產生大量的捕食器官。本發明方法簡單，易于操作，利于推廣應用。

技術領域

本發明屬于生物化學技術領域，具體涉及一種誘導寡孢節叢孢產生捕食器官的方法。

背景技術

植物寄生線蟲是引發全球植物病害的主要原因，每年會對全球經濟造成極大的損失，在我國，病原線蟲引起的病害已成為農業生產中僅次于真菌病害的第二大類病害，嚴重威脅我國糧食作物安全。長期以來，防治線蟲的方法有植物檢疫、農業防治、物理防治、化學防治和生物防治等。應用較為廣泛的是化學農藥,但由于殺線蟲化學農藥高毒性、高殘留，嚴重影響到農產品安全。因此，生防防治引發了人們的廣泛關注。

食線蟲微生物是指一類能夠侵染、捕捉和毒殺線蟲的微生物類群，是自然界中線蟲種群控制的重要因子，也是生物防治植物寄生線蟲的重要研究材料。其中捕食線蟲真菌(Nematode-trapping fungi)是一類規模龐大、種類繁多的真菌，其種類涉及子囊菌、擔子菌、結合菌和半知菌等，分布廣泛，對調控生態系統中線蟲種群平衡起重要作用，它可以分為四類，即：產生特殊的菌絲結構捕獲并殺死線蟲的捕食線蟲真菌；通過寄生性孢子寄生在線蟲卵上，然后利用萌發管從線蟲卵中吸收生長所需營養物質的內寄生真菌；通過定殖在線蟲卵上的菌絲來殺滅線蟲的機會真菌；以及通過分泌毒素來麻痹或殺死線蟲的產毒真菌。捕食線蟲真菌利用營養菌絲特化形成的捕食器官，如收縮環、非收縮環、粘球、粘性分枝、粘性網等完成對植物寄生線蟲的捕捉和侵染過程。目前，捕食線蟲真菌作為一種有效的生物防治資源已經廣泛應用于植物寄生線蟲的生物防治。與傳統化學農藥相比，微生物制劑具有安全、無污染、無殘留的優點，同時也存在防效不高的問題。了解捕食線蟲真菌的侵染機制，開發新的生防菌劑、擴大生防應用范圍，提高生防效果，都是急需解決的問題。

寡孢節叢孢(Arthrobotrys oligospora)是捕食線蟲真菌的模式種，通過產生捕食器官——三維菌網捕捉并殺死線蟲。捕食線蟲真菌的捕食器官是其侵染植物寄生線蟲的必要條件之一，產生的捕食器官越多，真菌對線蟲的捕食效率越高。因此通過提高寡孢節叢孢捕食器官的數量，能夠有效提高殺線蟲效率。寡孢節叢孢產生三維菌網受多種因素影響，產生三維菌網效果不穩定，捕器數量不多往往會影響到其生防效果。

因而提供一種能夠有效誘導寡孢節叢孢(A.oligospora)產生捕食器的方法依舊是目前迫切需要的。

發明內容

本發明主要目的是提供一種誘導寡孢節叢孢產生捕食器官的方法，本發明發現丁基-beta-d-吡喃葡萄糖苷能夠有效誘導寡孢節叢孢產生大量捕食器官，為誘導寡孢節叢孢產生捕食器官提供了一種新的方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供一種誘導寡孢節叢孢產生捕食器官的方法，其包括以下步驟：

寡孢節叢孢孢子的制備；

寡孢節叢孢孢子的制備方法包括：將寡孢節叢孢菌塊接種到CMA固體培養基上，20-30℃培養10-24天，待產生大量的孢子，將孢子用無菌水洗下，用六層無菌擦鏡紙過濾，收集濾液。

進一步地，將制備得到的孢子加入WA培養基中，20-30℃培養36-48h，加入丁基-beta-d-吡喃葡萄糖苷，20-30℃繼續培養。

進一步地，培養基中丁基-beta-d-吡喃葡萄糖苷的終濃度為2-40mM。

與現有技術相比，本發明具有以下優勢：